《食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)/食品科學(xué)與工程系列教材》：
　　實(shí)驗(yàn)1-2環(huán)境中的微生物檢測(cè)及菌落特征觀察
　　一、目的要求
　　了解環(huán)境中各類微生物的存在，并比較不同環(huán)境中微生物的數(shù)量和種類；理解微生物實(shí)驗(yàn)無(wú)菌操作技術(shù)的重要性；初步認(rèn)識(shí)各類微生物的菌落特征。
　　二、實(shí)驗(yàn)原理
　　微生物在環(huán)境中廣泛存在，但由于其個(gè)體微小，絕大部分用肉眼無(wú)法觀察到。人工制備的培養(yǎng)基中含有微生物生長(zhǎng)所需要的各種營(yíng)養(yǎng)成分，將取自不同來(lái)源的樣品接種于培養(yǎng)基上，并在適宜的溫度條件下培養(yǎng)，則微生物細(xì)胞能夠通過(guò)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的群體，即菌落。不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有不同的要求，實(shí)驗(yàn)室一般用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基）進(jìn)行細(xì)菌的培養(yǎng)，而馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）一般用于真菌的培養(yǎng)。不同微生物形成的菌落也有其各自的特征，如菌落的大小、表面干燥或濕潤(rùn)、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明、顏色及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通過(guò)選用營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板來(lái)分別檢測(cè)環(huán)境中的細(xì)菌和真菌等微生物的數(shù)量和種類。
　　三、實(shí)驗(yàn)材料
　�。�1）培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，馬鈴薯蔗糖瓊脂平板。
　　（2）儀器及其他用品：高壓蒸汽滅菌鍋，培養(yǎng)箱，棉簽（裝在試管或小玻璃瓶中滅菌后備用），試管架，記號(hào)筆，酒精燈，無(wú)菌水（裝在試管中備用），廢物缸等。
　　四、實(shí)驗(yàn)步驟
　　取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板各5副，其中各一副作為對(duì)照不做任何處理，其余各4副分別按如下方法處理。
　　1.空氣中微生物的檢測(cè)
　　取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板各一副；打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，在空氣中暴露約10min后蓋上；用記號(hào)筆在培養(yǎng)皿的底部做好標(biāo)記，將培養(yǎng)皿倒置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～4d。
　　2.實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上微生物的檢測(cè)
　�。�1）取棉簽：左手拿裝有棉簽的試管，在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指夾持并拔出棉塞（或試管帽）；將試管口在酒精燈（或煤氣燈）火焰上稍作燒灼；傾斜試管，用右手拇指和食指小心地取出一根棉簽；燒灼管口，塞回棉塞（或試管帽），將試管放回試管架。
　�。�2）弄濕棉簽：左手取無(wú)菌水試管，同上方法拔出棉塞（或試管帽）并燒灼試管口；將棉簽插入水中，再提出水面并在管壁上擠壓一下以除去過(guò)多的水分；小心取出棉簽，燒灼管口，塞回棉塞（或試管帽），并將試管放回試管架。
　�。�3）取樣：將濕棉簽在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上約2cm2的范圍內(nèi)來(lái)回擦拭數(shù)次（圖1-2A），以吸附臺(tái)面上的微生物。
　　（4）接種：取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板一副，在火焰旁用左手拇指和食指使培養(yǎng)皿開(kāi)啟一條縫；將棉簽伸入并在培養(yǎng)基表面來(lái)回擦拭接種（圖1-2B），注意不要將培養(yǎng)基擦破；立即閉合皿蓋，將用過(guò)的棉簽丟棄至廢物缸中；在培養(yǎng)皿底部用記號(hào)筆做好標(biāo)記。
　　圖1-2實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或皮膚表面微生物的取樣與接種方法
　　A.用濕棉簽在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或皮膚表面來(lái)回擦拭，以粘取微生物；B.將濕棉簽在平板培養(yǎng)基的表面來(lái)回涂抹，
　　使粘取的微生物轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上
　�。�5）培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿倒置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～4d。
　　采用同樣的方法取樣并接種PDA平板，做好標(biāo)記后將培養(yǎng)皿倒置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～4d。
　　3.人體皮膚表面微生物的檢測(cè)
　　采用上述方法，另取無(wú)菌棉簽并弄濕，然后將濕棉簽在自己手臂或耳根等處的皮膚表面約2cm2的范圍內(nèi)來(lái)回擦拭數(shù)次，并接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板。做好標(biāo)記后將培養(yǎng)皿倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～4d。
　　4.自來(lái)水中微生物的檢測(cè)
　　采用上述方法，另取無(wú)菌棉簽，但無(wú)需用無(wú)菌水弄濕，而是直接蘸取少量自來(lái)水；然后將蘸有自來(lái)水的濕棉簽在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和PDA平板的表面來(lái)回擦拭接種。做好標(biāo)記后將培養(yǎng)皿倒置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～4d。
　　五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
　　培養(yǎng)3～4d后，用相機(jī)拍攝各個(gè)平板的照片，并填寫(xiě)表1-2。
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