生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第2版）
定 價(jià)：39.8 元
叢書名：高等醫(yī)藥院�；A(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)系列教材
- 作者：宋方洲主編
- 出版時(shí)間：2013/1/1
- ISBN：9787030363220
- 出 版 社：科學(xué)出版社
- 中圖法分類：Q5-33
- 頁碼：259
- 紙張：膠版紙
- 版次：2
- 開本：16K
《高等醫(yī)藥院�；A(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)系列教材：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第2版）》分為基本實(shí)驗(yàn)操作及常用儀器使用、經(jīng)典驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)共四篇。在基礎(chǔ)理論知識方面，對生物化學(xué)與分子生物學(xué)的經(jīng)典研究技術(shù)、基本實(shí)驗(yàn)操作和常用儀器使用均進(jìn)行了詳細(xì)介紹。在實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目設(shè)置上，包括蛋白質(zhì)定量、層析、電泳、酶學(xué)、糖類與脂類、核酸分離純化、PCR、分子克隆、分子雜交以及RNA干擾、雙向電泳、EMSA和ChIP等經(jīng)典驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)。教材內(nèi)容新穎，體系完整，有所側(cè)重，便于選擇。
《高等醫(yī)藥院�；A(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)系列教材：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第2版）》可供醫(yī)學(xué)院校臨床醫(yī)學(xué)等各專業(yè)五年制、七年制和研究生學(xué)生使用，也可供相關(guān)專業(yè)的科研、教學(xué)和技術(shù)人員參考。
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實(shí)驗(yàn)教學(xué)是高等醫(yī)學(xué)教育的重要內(nèi)容，是培養(yǎng)學(xué)生實(shí)踐能力和創(chuàng)新精神的重要環(huán)節(jié)。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)諸多學(xué)科的重要研究手段，也是醫(yī)學(xué)類各專業(yè)、各層次學(xué)生必修的一門基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課程。為適應(yīng)高等醫(yī)學(xué)院�；A(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革和發(fā)展的形勢，我們按照重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革的統(tǒng)一部署和要求，編寫了這本實(shí)驗(yàn)教材。
本教材一共分為四篇。第一篇是基本實(shí)驗(yàn)操作及常用儀器使用，重點(diǎn)介紹了一些目前常用的生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究技術(shù)和常用儀器的使用方法以及基本的實(shí)驗(yàn)操作要求，目的在于使學(xué)生對生物化學(xué)與分子生物學(xué)的研究技術(shù)有一個(gè)系統(tǒng)的認(rèn)識。第二篇是經(jīng)典驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，開設(shè)了一些經(jīng)典的生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，這些實(shí)驗(yàn)均經(jīng)過長期的實(shí)驗(yàn)教學(xué)實(shí)踐，證明有助于學(xué)生鞏固理論知識和培養(yǎng)學(xué)生基本的實(shí)驗(yàn)操作能力。第三篇是綜合性實(shí)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)均涉及多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)的使用，通過相對系統(tǒng)地使用多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)來解決一個(gè)問題或達(dá)到一個(gè)研究目的，以培養(yǎng)學(xué)生的綜合性邏輯思維能力，對科學(xué)研究有一個(gè)初步的認(rèn)識。第四篇是創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)，通過由學(xué)生自己提出問題、解決問題的方式，以培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立思考和基本的科研能力。
本教材各部分實(shí)驗(yàn)的編寫均由多年從事生物化學(xué)與分子生物學(xué)教學(xué)及科研的學(xué)術(shù)帶頭人和中青年骨干教師執(zhí)筆。另外，在實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的設(shè)置上，我們也選取了一部分目前科學(xué)研究中經(jīng)常使用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，如功能基因組學(xué)研究中常用的RNA干擾實(shí)驗(yàn)、蛋白質(zhì)組學(xué)研究中常用的雙向電泳實(shí)驗(yàn)以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究中常用的啟動子活性分析實(shí)驗(yàn)、EMSA實(shí)驗(yàn)和ChIP實(shí)驗(yàn)等，并注重實(shí)驗(yàn)的可操作性與實(shí)用性。
本教材不僅適合醫(yī)學(xué)院校臨床醫(yī)學(xué)等各專業(yè)五年制、七年制和研究生學(xué)生使用，而且也可供相關(guān)專業(yè)的科研、教學(xué)和技術(shù)人員參考。
由于編者水平有限，時(shí)間倉促，教材中不當(dāng)或錯(cuò)誤之處在所難免，懇請同行專家和同學(xué)們批評指正，以便再版時(shí)修正完善。
目錄
第一篇 基本實(shí)驗(yàn)操作及常用儀器使用
第1章 生物化學(xué)常用研究技術(shù)(1)
第2章 分子生物學(xué)常用研究技術(shù)(18)
第3章 基本實(shí)驗(yàn)操作(23)
第4章 常用儀器使用(34)
第5章 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則及安全防護(hù)(46)
第6章 如何撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告(48)
第二篇 經(jīng)典驗(yàn)證性試驗(yàn)
第1章 蛋白質(zhì)定量實(shí)驗(yàn)(49)
實(shí)驗(yàn)一 雙縮脲法測定血清蛋白質(zhì)含量(50)
實(shí)驗(yàn)二 Folin-酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量(52)
實(shí)驗(yàn)三 紫外分光尤皮法測定蛋白質(zhì)含量(54)
實(shí)驗(yàn)四 考馬斯亮藍(lán)結(jié)合法測定蛋白質(zhì)含量(57)
實(shí)驗(yàn)五 BCA法測定蛋白質(zhì)含量(57)
第2章 層析實(shí)驗(yàn)(61)
實(shí)驗(yàn)六 紙層析法觀察轉(zhuǎn)氨基作用(61)
實(shí)驗(yàn)七 葡聚糖凝膠柱層析分離血紅蛋白與魚精蛋白(63)
實(shí)驗(yàn)八 離子交換層析分離混合氨基酸(66)
實(shí)驗(yàn)九 薄層層析分離鑒定氨基酸(68)
第3章 電泳實(shí)驗(yàn)(72)
實(shí)驗(yàn)十 血清醋釀纖維薄膜電泳(72)
實(shí)驗(yàn)十一 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清LDH同工酶(76)
實(shí)驗(yàn)十二 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)的分子量(81)
第4章 酶學(xué)實(shí)驗(yàn)(86)
實(shí)驗(yàn)十三 血清堿性磷酸酶活性測定(86)
實(shí)驗(yàn)十四 血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性測定(89)
實(shí)驗(yàn)十五 影響且是蛋白酶作用的因素(92)
實(shí)驗(yàn)十六 丙二酸對琥珀脫氫酶的競爭性抑制作用(95)
實(shí)驗(yàn)十七 酶的非競爭性抑制作用(98)
實(shí)驗(yàn)十八 酶米氏常數(shù)的測定(100)
第5章 糖類與脂類(103)
實(shí)驗(yàn)十九 血糖濃度的測定(103)
實(shí)驗(yàn)二十 腎上腺素對血糖濃度的影響(106)
實(shí)驗(yàn)二十一 血清甘油二醋濃度測定(108)
實(shí)驗(yàn)二十二 血清總膽固醇濃度測定(112)
實(shí)驗(yàn)二十三 血清載脂蛋白apoA1的測定(117)
第6章 核酸分離純化技術(shù)(120)
實(shí)驗(yàn)二十四 基因組DNA的提取制備與檢測(120)
實(shí)驗(yàn)二十五 全血基因組DNA的試劑盒法提取制備與檢測(124)
實(shí)驗(yàn)二十六 總RNA的提取制備與檢測(124)
實(shí)驗(yàn)二十七 質(zhì)粒DNA的提取制備與檢測(131)
實(shí)睡二十八 動物組織核酸的提取及成分鑒定(137)
第7章 Pα技術(shù)(140)
實(shí)驗(yàn)二十九 常規(guī)PCR技術(shù)(140)
實(shí)驗(yàn)二十 定量PCR技術(shù)(144)
第8章 分子克隆技術(shù)(148)
實(shí)驗(yàn)三十一 DNA的限制性酶切與電泳檢測(148)
實(shí)驗(yàn)三十二 凝膠中DNA片斷的純化回收(151)
實(shí)驗(yàn)三十二 DNA連接實(shí)驗(yàn)(153)
實(shí)驗(yàn)三十四 感受態(tài)細(xì)胞的制備(157)
實(shí)驗(yàn)三十五 重組DNA轉(zhuǎn)化與藍(lán)白斑篩選(159)
第9章 分子雜交技術(shù)(162)
實(shí)驗(yàn)三十六 Southern印跡雜交(162)
實(shí)驗(yàn)三十七 Northern印邊雜交111111(166)
實(shí)驗(yàn)三十八 Western印跡(169)
實(shí)驗(yàn)二十九 核酸原位雜交(172)
附 核酸分子探針的標(biāo)記(177)
第三篇 綜合性實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)一 血清γ球蛋白的分離純化與鑒定(180)
實(shí)驗(yàn)二 堿性磷酸酶的分離純化與動力學(xué)研究(186)
實(shí)驗(yàn)三 β肌動蛋白基因的克隆(193)
實(shí)驗(yàn)四 hCS在大腸埃希菌中的表達(dá)、純化與鑒定(200)
實(shí)驗(yàn)五 hCS基因在畢赤酵母中的表達(dá)及鑒定(206)
實(shí)驗(yàn)六 熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)(210)
實(shí)驗(yàn)七 雙脫氧鏈末端合成終止法測定DNA序列(213)
實(shí)驗(yàn)八 膚或蛋白質(zhì)N-端氨基酸序列測定(219)
實(shí)驗(yàn)九 用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測啟動子活性(228)
實(shí)驗(yàn)十 電泳遷移阻滯實(shí)驗(yàn)(232)
實(shí)驗(yàn)十一 染色質(zhì)免疫沉淀(237)
實(shí)驗(yàn)十二 蛋白質(zhì)雙向電泳(242)
實(shí)驗(yàn)十三 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)(247)
實(shí)驗(yàn)十四 RNA干擾實(shí)驗(yàn)(250)
第四篇 創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)一 重要蛋白質(zhì)或酶的分離純化(255)
實(shí)驗(yàn)二 糖尿病的生化及遺傳檢測分析實(shí)驗(yàn)(255)
實(shí)驗(yàn)三 家族性高膽固醇血癥的診斷(256)
實(shí)驗(yàn)四 血友病的分子診斷(258)
實(shí)驗(yàn)五 RNA干擾技術(shù)靶向沉默目的基因(259)
（一）基本原理
所有的層析系統(tǒng)都由兩個(gè)相組成，即固定相和流動相。固定相或者是固體物質(zhì)或者是固定于固體物質(zhì)上的某些成分，而流動相指的是可以流動的物質(zhì)，既可以是水或各種有機(jī)溶媒及其混合物，也可以是各種氣體。待分離的混合物進(jìn)入層析系統(tǒng)時(shí)，混合物各組分隨著流動相通過固定相，由于混合物各組分的理化性質(zhì)存在差異，與兩相的相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，導(dǎo)致它們在兩相中的分配比不同。各組分隨著流動相不斷向前移動，實(shí)現(xiàn)在兩相中的再分配。與固定相相互作用力較弱的組分，隨流動相移動時(shí)受到的阻力較小，向前移動的速度較快，優(yōu)先流出層析系統(tǒng)。反之，與固定相相互作用力較強(qiáng)的組分，向前移動的速度較慢，流出層析系統(tǒng)的時(shí)間晚。然后分別收集代表各單一組分的流出液，實(shí)現(xiàn)組分分離。
�。ǘ⿲游黾夹g(shù)分類與應(yīng)用
按照層析的分離相狀態(tài)分類，可以分為氣相層析、液相層析和超臨界層析。氣相層析是以氣體為流動相的層析方法，根據(jù)固定相的性質(zhì)不同又可分為氣-固層析和氣-液層析。前者是指載體表面含有許多吸附基團(tuán)的固體吸附介質(zhì)，后者是指載體表面涂有一層液體分子制成的介質(zhì)。液相層析是以液體為流動相的層析方法，同樣可根據(jù)固定相的性質(zhì)不同把液相層析分為液-固層析和液-液層析。超臨界層析是以流體為流動相的層析方式，它是利用流動相溶劑分子的氣態(tài)和液態(tài)臨界點(diǎn)的條件下進(jìn)行分離的，這種分離方法更具專一性。
按照層析操作形式分類，可以分為柱層析、薄層層析、紙層析、薄膜層析等。例如，薄層層析是在玻璃板上涂布一層支持劑，待分離樣品點(diǎn)在薄層板一端，然后讓推動劑從上流過，從而使各組分得到分離的物理方法。薄層層析設(shè)備簡單，操作簡便，快速靈敏。改變薄層厚度，既可作分析鑒定，又能作少量制備。配合薄層掃描儀，可同時(shí)做到定性定量分析，在生物化學(xué)、植物化學(xué)等領(lǐng)域是一類廣泛應(yīng)用的物質(zhì)分離方法。
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