《生物化學(xué)實驗（第二版）》主要內(nèi)容包括生物化學(xué)實驗基本要求與常用儀器使用方法和實驗兩大部分，有基本操作、制備、分光光度技術(shù)、熒光光譜技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、離心技術(shù)熒光，還有糖、蛋白質(zhì)、酶、維生素、核酸、體內(nèi)代謝、生物化學(xué)綜合實驗等和三個附錄等。《生物化學(xué)實驗（第二版）》涵蓋了基本的實驗，內(nèi)容適中，針對性強(qiáng)，具有較強(qiáng)的實踐指導(dǎo)意義。
第一部分 生物化學(xué)實驗基本要求與常用儀器使用方法
第一章 生物化學(xué)實驗基本操作
第二章 生物活性成分的制備
第三章 分光光度技術(shù)
第四章 熒光光譜技術(shù)
第五章 層析技術(shù)
第六章 電泳技術(shù)
第七章 離心技術(shù)
第二部分 實驗
第八章 糖
實驗一 總糖和還原糖的測定（3，5．二硝基水楊酸法）
實驗二 蒽酮比色定糖法
實驗三 血液中葡萄糖含量的測定（Folin-Wu法）
第九章 蛋白質(zhì)
實驗四 蛋白質(zhì)含量的測定
I．凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量
Ⅱ．紫外吸收法測定蛋白質(zhì)含量
Ⅲ．雙縮脲（Biuret）法測定蛋白質(zhì)含量
Ⅳ．Folin．酚法測定蛋白質(zhì)含量
V．考馬斯亮藍(lán)G．250法測定蛋白質(zhì)含量
實驗五 醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)
實驗六 不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離預(yù)染的血清脂蛋白
實驗七 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量
實驗八 凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量
實驗九 植物組織中游離氨基酸的分離鑒定
實驗十 蛋白質(zhì)兩性解離及等電點的測定
第十章 酶
實驗十一 影響酶作用的因素
實驗十二 過氧化氫酶活力的測定
實驗十三 淀粉酶活力的測定
實驗十四 植酸酶活性的測定
實驗十五 蛋白酶活性的測定
實驗十六 血清堿性磷酸酶活性的測定
實驗十七 蕎麥胰蛋白酶抑制劑活性測定
實驗十八 離子交換層析法純化養(yǎng)麥胰蛋白酶抑制劑
實驗十九 親和層析法純化蕎麥胰蛋白酶抑制劑
實驗二十 葡萄糖苷酶活性的測定（pNPG法）
實驗二十一 苦蕎重組PAL的活性鑒定
第十一章 維生素
實驗二十二 維生素c的定量測定
實驗二十三 維生素B1的定量測定
第十二章 核酸
實驗二十四 植物組織中DNA的提取和純度鑒定
實驗二十五 肝臟DNA的提取及純度鑒定
實驗二十六 質(zhì)粒DNA的小量提�。▔A裂解法）
實驗二十七 納米磁性粒子法小量提取細(xì)菌質(zhì)粒DNA
實驗二十八 植物葉片總RNA小量制備（Trizol法）
實驗二十九 紫外吸收法測定核酸含量
實驗三十 二苯胺法測定DNA含量
實驗三十一 定磷法測定RNA含量
實驗三十二 瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定：DNA
第十三章 體內(nèi)代謝
實驗三十三 酶促轉(zhuǎn)氨基作用及其鑒定
實驗三十四 胰島素和腎上腺素對血糖濃度的影響
實驗三十五 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（SGPT）活力測定
實驗三十六 植物總黃酮的提取與測定
第十四章 生物化學(xué)綜合實驗
實驗三十七 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳及蛋白印跡
實驗三十八 豬血超氧化物歧化酶的分離純化、活性測定及同工酶鑒定
實驗三十九 目的基因的PCR擴(kuò)增
附錄
附錄A 常用緩沖溶液的配制方法
附錄B 硫酸銨飽和度的常用表
附錄C 常用指示劑的配制
參考文獻(xiàn)
《生物化學(xué)實驗（第二版）》：
2.定量測定
在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時，其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系，即IF=Kc，利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析，與紫外—可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。該法常用于測定氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸的含量。熒光定量測定的一個優(yōu)點是靈敏度高，例如維生素B2的測定限量可達(dá)0.001μg／mL，這一優(yōu)點使測定時所需要樣品量大大減少。該法還可應(yīng)用于酶的含量及酶反應(yīng)的速率測定等。
3.研究生物大分子的物理化學(xué)特性及分子結(jié)構(gòu)和構(gòu)象
熒光的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數(shù)不僅和分子內(nèi)熒光發(fā)色基團(tuán)的本身結(jié)構(gòu)有關(guān)，而且還強(qiáng)烈地依賴于發(fā)色團(tuán)周圍的環(huán)境，即對周圍環(huán)境十分敏感。利用此特點可通過測定上述有關(guān)熒光參數(shù)的變化來研究熒光發(fā)色團(tuán)所在部位的微環(huán)境的特征及其變化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團(tuán)（如色氨酸、酪氨酸、鳥苷酸等，此類熒光稱為內(nèi)源熒光）以外，可將一些特殊的熒光染料分子共價地結(jié)合或吸附到生物大分子上，通過測定該染料分子的熒光變化來研究生物大分子（這種染料分子被稱為“熒光探針”），它們發(fā)出的熒光一般稱為外源熒光。熒光探針的應(yīng)用，大大地開拓了熒光技術(shù)在生物學(xué)中的應(yīng)用范圍。
4.通過對熒光壽命、量子產(chǎn)率等參數(shù)研究生物分子間的能量轉(zhuǎn)移
如果兩種不同的熒光生色團(tuán)離得較近，且其中一種生色團(tuán)的熒光發(fā)射譜與另一種生色團(tuán)的激發(fā)譜有相當(dāng)程度的重疊。則當(dāng)?shù)谝环N熒光團(tuán)被激發(fā)時，另一種熒光團(tuán)卻因第一種生色團(tuán)激發(fā)能的轉(zhuǎn)移而被激發(fā)，這種現(xiàn)象稱為熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）。產(chǎn)生FRET時必須具備三個條件：D和A都能發(fā)光；D的反射譜和A的激發(fā)譜必須有部分重疊；D和A之間的距離必須小于10 nm。Forster由此推出E=R06／（R6+R06）。R0稱為臨界距離，定義為能量轉(zhuǎn)移效率為50%時兩個生色團(tuán)之間的距離，對于每個供體一受體時，R0是常數(shù)。R0可以根據(jù)受體的吸收譜和供體的發(fā)射譜、介質(zhì)的折射系數(shù)、供體和受體躍遷電偶極矩的朝向因子、供體在沒有受體存在時的量子產(chǎn)率等參數(shù)估算出來。根據(jù)轉(zhuǎn)移效率和R0，即可求出兩個生色團(tuán)之間的距離。
近年來人們趨于用熒光偏振隨時間的衰減來研究生物大分子動力學(xué)。在這種方法中，激發(fā)光不是一連續(xù)的面偏振光，而是一偏振的光脈沖，因此測得的F／／和F是在兩個不同方向上偏振的熒光隨時間的衰減，它既和熒光壽命T有關(guān)，又與分子在溶液中的運動有關(guān)，因此常表示為F／／（f）和F□—（t）。由它們可得一相當(dāng)重要的物理量——各向異性參數(shù)A（t）。
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