《分子生物學(xué)實驗教程》以高效表達(dá)鼠源的GAPDH蛋白為例,從RNA的提取、定性與定量、CDNA的合成、表達(dá)載體的克隆、轉(zhuǎn)染與表達(dá),以及對蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)與鑒定等設(shè)計了一系列相應(yīng)的實驗。每一個實驗既簡明扼要地介紹相關(guān)理論,詳細(xì)描述實驗操作過程,還包括完成該實驗過程中可能存在的問題。每個實驗后均展示了理想的實驗結(jié)果。與書配套的數(shù)字課程提供各實驗的教學(xué)課件,為教師備課和學(xué)生課前預(yù)習(xí)提供參考!斗肿由飳W(xué)實驗教程》具有明確的思路和完整的內(nèi)容,對生物學(xué)、醫(yī)學(xué)以及藥學(xué)本科生掌握分子生物學(xué)實驗的基本技能具有很好的指導(dǎo)意義。
第1章 動物組織RNA的提取與電泳鑒定
實驗1-1 動物組織RNA的提取
實驗1-2 RNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測
第2章 核酸與蛋白含量的測定——紫外分光光度法
實驗2-1 RNA濃度測定
第3章 細(xì)菌質(zhì)粒DNA的堿法制備
實驗3-1 質(zhì)粒DNA的提取
實驗3-2 質(zhì)粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定
第4章 目的基因的RT-PCR
實驗4-1 目的基因的RT-PCR
實驗4-2 PCR產(chǎn)物電泳檢測與膠回收
第5章 質(zhì)粒與目的基因的酶切
實驗5-1 質(zhì)粒與目的基因的酶切
實驗5-2 酶切產(chǎn)物電泳鑒定和純化
第6章 目的基因與載體的連接、轉(zhuǎn)化
實驗6-1 DNA分子細(xì)胞外重組
實驗6-2 重組DNA轉(zhuǎn)化
第7章 轉(zhuǎn)化子的篩選與目的蛋白鑒定
實驗7-1 轉(zhuǎn)化子篩選
實驗7-2 目的蛋白Western斑點印跡法鑒定
實驗7-3 目的蛋白Western印跡法實驗
實驗7-4 原核表達(dá)目的蛋白GST-mGAPDH的親和吸附純化
第8章 IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌表達(dá)的最適條件
實驗8-1 IPTG誘導(dǎo)時機對外源蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
實驗8-2 誘導(dǎo)物IPTG的濃度對外源蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
實驗8-3 IPTG誘導(dǎo)時間對外源蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
實驗8-4 外源蛋白質(zhì)誘導(dǎo)表達(dá)
第9章 實時定量PCR分析IPTG對啟動子活性的調(diào)節(jié)作用
實驗9-1 大腸桿菌RNA制備
實驗9-2 實時定量RT-PCR檢測大腸桿菌中mGAPDH mRNA的表達(dá)量