本書(shū)涵蓋了分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù),分子生物學(xué)相關(guān)的細(xì)胞、組織和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),分子生物學(xué)常用數(shù)據(jù)庫(kù),分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)方法。本書(shū)實(shí)用性強(qiáng)、均是作者親自做過(guò)、非常熟悉的操作,所涉及的內(nèi)容均為常用且成熟的實(shí)驗(yàn)方法,側(cè)重于實(shí)驗(yàn)的具體操作、注意事項(xiàng)及個(gè)人的體會(huì),符合初學(xué)者的需要,也可為從事基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的人員提供幫助,書(shū)中每一章節(jié)都附有作者的聯(lián)系方式,若遇到相關(guān)問(wèn)題可及時(shí)與作者交流。本書(shū)是研究生們不可多得的一本有價(jià)值參考書(shū)。
李燕,女,37歲,中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室副教授。中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)會(huì)員,中國(guó)神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)會(huì)員。獲評(píng)陜西省青年科技新星和原總后勤部?jī)?yōu)秀青年科技人才扶持對(duì)象。享受陜西省三秦人才津貼和軍隊(duì)優(yōu)秀專(zhuān)業(yè)技術(shù)人才崗位津貼。從事醫(yī)學(xué)本科生和研究生教學(xué)工作14年。主編專(zhuān)著3部,參編教材5部。近年來(lái)發(fā)表SCI收錄科技論文27篇;發(fā)表教學(xué)論文6篇;主持國(guó)家自然科學(xué)基金3項(xiàng);獲國(guó)家專(zhuān)利授權(quán)2項(xiàng)。
第一章 PCR技術(shù)
第一節(jié) RT-PCR
第二節(jié) 實(shí)時(shí)定量PCR
第二章 RNA干擾技術(shù)
第三章 MicroRNA研究方法
第四章 長(zhǎng)鏈非編碼RNA研究方法
第一節(jié) 長(zhǎng)鏈非編碼RNA概述
第二節(jié) RNA pull-down鑒定RNA-蛋白質(zhì)相互結(jié)合
第三節(jié) RNA免疫共沉淀技術(shù)
第五章 CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)
第一節(jié) SgRNA的設(shè)計(jì)及打靶效應(yīng)分析
第二節(jié) 受精卵注射CRISPR/Cas9系統(tǒng)制備基因編輯動(dòng)物
第六章 重組DNA技術(shù)
第一節(jié) 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
第二節(jié) 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化
第三節(jié) 質(zhì)粒提取
第四節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA
第五節(jié) 凝膠回收DNA
第六節(jié) 重組DNA的構(gòu)建
第七節(jié) 病毒載體介導(dǎo)的重組DNA技術(shù)
復(fù)制缺陷型腺病毒載體的包裝
慢病毒載體的包裝
第八節(jié) 目的蛋白的原核表達(dá)與分離純化
目的蛋白的原核誘導(dǎo)表達(dá)
目的蛋白的表達(dá)檢測(cè)
菌體的細(xì)胞破碎
鎳離子親和層析純化
DEAE陰離子交換層析
凝膠過(guò)濾層析
第七章 Western-blot技術(shù)
第一節(jié) 蛋白樣品制備
第二節(jié) 蛋白定量
第三節(jié) SDS-PAGE電泳
第四節(jié) 電轉(zhuǎn)移
第五節(jié) 酶免疫定位
第八章 蛋白相互作用篩選及驗(yàn)證
第一節(jié) 酵母雙雜交系統(tǒng)篩選
第二節(jié) 免疫共沉淀
第三節(jié) Pull-down實(shí)驗(yàn)
第九章 蛋白泛素化檢測(cè)
第十章 轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究
第一節(jié) 轉(zhuǎn)錄因子與靶基因相關(guān)性分析
第二節(jié) 靶基因的啟動(dòng)子克隆
第三節(jié) 報(bào)告基因活性分析
第四節(jié) DNA-轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合分析
第五節(jié) ChIP-Seq技術(shù)
第十一章 核酸甲基化分析
第一節(jié) 基因組DNA提取
第二節(jié) DNA甲基化分析
第三節(jié) RNA甲基化分析
第十二章 基因表達(dá)譜芯片分析
第十三章 蛋白質(zhì)譜分析
第十四章 細(xì)胞代謝研究方法
第一節(jié) 基于Seahorse生物能量分析儀測(cè)定糖酵解和線(xiàn)粒體有氧代謝的方法
第二節(jié) 線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合體功能的測(cè)定
第十五章 相關(guān)細(xì)胞學(xué)技術(shù)
第一節(jié) 細(xì)胞凍存
第二節(jié) 細(xì)胞復(fù)蘇
第三節(jié) 細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定生長(zhǎng)曲線(xiàn)
第四節(jié) MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖
第五節(jié) CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖
第六節(jié) BrdU法測(cè)定細(xì)胞增殖
第七節(jié) 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
第八節(jié) 軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)
第九節(jié) Transwell
第十節(jié) 劃痕實(shí)驗(yàn)
第十一節(jié) 細(xì)胞周期的測(cè)定
第十二節(jié) 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
第十三節(jié) 脂質(zhì)體介導(dǎo)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
第十四節(jié) 病毒感染
第十六章 相關(guān)組織學(xué)技術(shù)
第一節(jié) 動(dòng)物組織取材和固定
第二節(jié) 臨床標(biāo)本收集方法
第三節(jié) 免疫組織(細(xì)胞)化學(xué)
第四節(jié) 間接免疫熒光
第五節(jié) 原位雜交技術(shù)
第十七章 相關(guān)常用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
第一節(jié) 裸鼠移植瘤動(dòng)物模型
第二節(jié) 小動(dòng)物活體成像技術(shù)
第十八章 分子生物學(xué)常用數(shù)據(jù)庫(kù)
第一節(jié) 基因基本信息的獲取
第二節(jié) 基因表達(dá)調(diào)控分析
第三節(jié) 基因功能分析
第十九章 計(jì)算機(jī)模擬輔助小分子藥物設(shè)計(jì)
第一節(jié) 基于藥效團(tuán)模型的虛擬篩選方法
第二節(jié) 基于分子對(duì)接的虛擬篩選
第三節(jié) 骨架遷越
第二十章 常用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)方法
第一節(jié) 完全隨機(jī)設(shè)計(jì)分組
第二節(jié) 樣本量估計(jì)軟件實(shí)現(xiàn)
第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄及預(yù)處理
第四節(jié) 統(tǒng)計(jì)分析方法的選擇
第五節(jié) 學(xué)術(shù)論文設(shè)計(jì)方法描述