本書共列三十個分子生物學(xué)實驗及其相關(guān)附錄, 內(nèi)容不僅涵蓋了基因克隆、基因表達、核酸及蛋白分子雜交等分子生物學(xué)常規(guī)實驗, 也包括基因檢測、基因打靶、RNA干擾、蛋白分析等新型的分子生物學(xué)技術(shù)。每個實驗包括原理介紹、實驗操作、常見問題及注意事項。
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《分子生物學(xué)實驗原理與技術(shù)實驗》可用于高等院校生物、醫(yī)藥學(xué)科各專業(yè)本科生和研究生的分子生物學(xué)實驗指導(dǎo)教材，同時也可作為從事相關(guān)領(lǐng)域的教學(xué)、科研人員的一本有益的參考書。
目錄
前言
實驗一 DNA的提取 1
實驗二 核酸的定量 8
實驗三 真核細(xì)胞總RNA的提取 11
實驗四 PCR擴增目的基因 17
實驗五 RT-PCR 25
實驗六 DNA瓊脂糖凝膠電泳 31
實驗七 從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段 36
實驗八 目的基因片段與載體的連接 39
實驗九 用氯化鈣法制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞 42
實驗十 重組DNA的轉(zhuǎn)化 44
實驗十 DNA酶切 48
實驗十二 轉(zhuǎn)化克隆的篩選和鑒定 52
實驗十三 質(zhì)粒DNA的分離純化 55
實驗十四 含甘油培養(yǎng)物保藏法 65
實驗十五 Southern blot分析 67
實驗十六 Northern blot分析 74
實驗十七 實時定量PCR技術(shù) 78
實驗十八 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù) 87
實驗十九 mRNA差異顯示技術(shù) 93
實驗二十 外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達 97
實驗二十一 SDS-PAGE檢測蛋白質(zhì)的表達 100
實驗二十二 Western blot檢測蛋白質(zhì)的表達 107
實驗二十三 雙向電泳技術(shù) 114
實驗二十四 DNA甲基化的檢測 138
實驗二十五 哺乳動物細(xì)胞中的RNA干擾技術(shù) 141
實驗二十六 小鼠血漿microRNA提取技術(shù) 144
實驗二十七 DNA芯片技術(shù)檢測病原 147
實驗二十八 TALEN載體的設(shè)計與構(gòu)建 149
實驗二十九 TALEN定點制備及篩選突變體 155
實驗三十 CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組定點編輯技術(shù) 157
主要參考文獻 163
附錄 166
實驗一DNA的提取
【實驗?zāi)康摹?nbsp;
了解DNA提取的基本原理，掌握DNA的提取方法
【實驗原理】
遺傳信息全部儲存在DNA -級結(jié)構(gòu)之中，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質(zhì)脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整
一分離純化DNA的原則
(l)保持DNA分子一級結(jié)構(gòu)的完整性溫度不要過高;控制一定的pH范圍(pH5~9)，保持一定的離子強度，減少物理因素對核酸降解的機械剪切力
(2)防止DNA的生物降解細(xì)胞內(nèi)或外來的各種核酸酶能消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵，破壞核酸一級結(jié)構(gòu)因此，所用器械和一些試劑需要高溫滅菌，提取緩沖液中也需要加核酸酶抑制劑
二分離提取核酸的主要步驟
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