定 價：118 元
叢書名：普通高等教育“十三五”規(guī)劃教材普通高等院校工程實踐系列規(guī)劃教材
- 作者：張正光著
- 出版時間：2017/3/1
- ISBN：9787030521149
- 出 版 社：科學(xué)出版社
- 中圖法分類：TQ464
- 頁碼：300
- 紙張：膠版紙
- 版次：1
- 開本：16K
本書共分十章，主要介紹近30多年來生物制約技術(shù)在癌癥研究、阿爾茨海默病、帕金森病、自身免疫疾病、心腦血管疾病、人體器官移植及組織培養(yǎng)等領(lǐng)域的最新進展。
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生物技術(shù)制藥是一項非常復(fù)雜的系統(tǒng)工程，需要多個學(xué)科、多個實驗室、幾十到幾百名各專業(yè)技術(shù)人員協(xié)同配合，而且需要經(jīng)過多年堅持不懈的努力工作才能完成。發(fā)達(dá)國家研制一個治療用新生物藥品要用10～20年，且要花費20多億美元的巨額資金。完成一個新藥的步驟有：發(fā)現(xiàn)新藥苗頭，獲取相應(yīng)的目的基因，進行基因重組（基因表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建），構(gòu)建基因工程菌或工程細(xì)胞，進行重組蛋白中試工藝研究（包括工程茵大規(guī)模發(fā)酵或工程細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)、目標(biāo)蛋白產(chǎn)品大規(guī)模純化）、藥學(xué)研究及藥效學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)（包括急性毒性和長期毒性研究）、藥物動力學(xué)研究，向國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）申報注冊，經(jīng)評審批準(zhǔn)后，完成I、Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗，經(jīng)過國家食品藥品監(jiān)督管理總局再次評審批準(zhǔn)后，獲得新藥證書，之后才能在醫(yī)院試用，最后還要完成Ⅳ期臨床擴大研究（要求治療該藥適應(yīng)證2000名患者），才能最終獲準(zhǔn)上市并進行大規(guī)模生產(chǎn)。如此，才算完成了生物技術(shù)藥物研究的全過程。
生物技術(shù)藥物研究（包括化學(xué)藥物研究）是知識密集型產(chǎn)業(yè)，需要許多專業(yè)技術(shù)人才從事該項研究工作。藥物研究必須遵循藥物非臨床試驗管理規(guī)范（good laboratory practice，GLP），即所有從事藥物研究的試驗研究人員都必須遵守GLP原則。GLP作為一種質(zhì)量管理系統(tǒng)，它包括計劃、執(zhí)行、監(jiān)測、記錄、檔案和報告等內(nèi)容。非臨床健康和環(huán)境安全研究的過程和條件是其關(guān)注焦點。目的是促進開發(fā)出優(yōu)質(zhì)的測試數(shù)據(jù)，提供實驗研究的進行、報告和歸檔等方面確切可靠的管理手段。原則是建立一套以質(zhì)量（quality）、可信性（reliability）和完整性（integrity）為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到結(jié)論是可檢驗的，數(shù)據(jù)是可追蹤的。
新西蘭于1972年頒布實施了《實驗室登記法》，是最早頒布實施GLP法規(guī)的國家。1973年，丹麥實行相似制度。但是第一個真正實行GLP的國家是美國，1976年，美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）制定了藥品GLP規(guī)范草案，1978年正式實施。1979年世界經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（OECD）成立GLP專家組，并于1982年頒布實施化學(xué)品GLP。1983年，美國國家環(huán)境保護局（EPA）頒布實施《農(nóng)藥GLP規(guī)范》。1984年，日本農(nóng)林水產(chǎn)�。∕AFF）頒布GLP公告。1987年，歐盟頒布GLP法規(guī)和準(zhǔn)則；1988～2004年，歐盟又對GLP法規(guī)進行了7次增補和修訂，OECD進行了12次增補和修訂，但二者GLP的原則一致。
目錄
第一章 緒論 1
一、生物制藥技術(shù)突飛猛進，生物制藥產(chǎn)業(yè)不斷涌現(xiàn) 1
二、癌癥研究取得新突破 4
三、阿爾茨海默病、帕金森病、腦卒中及脊椎外傷研究取得新進展 7
四、自身免疫性疾病有了新的治療途徑 7
五、人體器官移植進展迅速8
六、預(yù)防和治療心腦血管疾病有了新手段 8
七、預(yù)防和治療病毒感染有了新希望 9
第二章 原核細(xì)胞基因工程制藥技術(shù) 11
第一節(jié) 原核細(xì)胞基因工程藥物研制技術(shù)簡述 11
一、基因工程藥物 11
二、原核細(xì)胞基因質(zhì)粒表達(dá)載體的構(gòu)建 15
三、基因工程菌株的構(gòu)建 21
四、轉(zhuǎn)化大腸桿菌(構(gòu)建基因工程菌) 21
第二節(jié) 工程菌高密度發(fā)酵 27
一、發(fā)酵罐的消毒滅菌27
二、接種培養(yǎng)發(fā)酵 29
三、菌體收集 29
四、菌體破碎 29
第三節(jié) 包含體復(fù)性 33
一、包含體蛋白復(fù)性方法 33
二、提高包含體蛋白的復(fù)性產(chǎn)率 34
第三章 真核細(xì)胞表達(dá)蛋白藥物研制 40
第一節(jié) 目的基困的獲得 40
一、目的基因獲得的途徑 40
二、基因擴增一-PCR技術(shù) 41
第二節(jié) 真核細(xì)胞常用表達(dá)載體 42
一、pEGFP-N1載體的特點 42
二、GFp 42
三、克隆化的真核基因在哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá) 43
第二節(jié) 真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的一般程序 44
一、試劑準(zhǔn)備 44
二、操作步驟 44
三、SHG-44細(xì)胞的轉(zhuǎn)染 45
四、G418篩選 45
第四節(jié) 載體構(gòu)建步驟 48
一、克隆構(gòu)建 48
二、載體的選擇 49
三、體外重組 49
四、重組子的篩選 49
五、克隆載體導(dǎo)入受體細(xì)胞 52
第五節(jié) 克隆載體轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞 53
一、化學(xué)轉(zhuǎn)染 53
二、物理轉(zhuǎn)染 54
三、重組表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞轉(zhuǎn)染 55
第六節(jié) 重組基因工程細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng) 59
一、重組基因工程細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)操作程序 59
二、激流式生物反應(yīng)器 63
三、中空纖維生物反應(yīng)器 65
第四章 基因重組蛋白的純化 67
第一節(jié) 目標(biāo)蛋白的粗純化H 67
一、離子交換色譜法 67
二、疏水相互作用色譜 69
三、親和色譜 70
四、融合蛋白的純化 72
五、反膠團萃取 74
六、濁點萃取法 75
七、硫酸接分級沉淀法(鹽析法) 79
八、且又水相萃取技術(shù)分離純化蛋白質(zhì) 81
第二節(jié) 目標(biāo)蛋白精純化 87
一、凝肢色譜 87
二、雙水相高速逆流色譜法 90
第二節(jié) 目標(biāo)蛋白大規(guī)模純化 94
一、重組人血清白蛋白(rHSA)的分離提純 94
二、Streamline擴張床純化重組蛋白 96
第四節(jié) 目標(biāo)蛋白去病毒工藝 101
一、離子交換色譜去除病毒工藝 101
二、凝肢色譜去除病毒工藝 102
三、親和色譜去除病毒工藝 103
四、疏水相互作用色譜去病毒工藝 103
五、去除滅活病毒的其他方法 104
第五節(jié) 重組蛋白冷凍干燥工藝 109
一、冷凍干燥的意義 109
二、蛋白質(zhì)干的保護劑 110
三、退火 111
四、干燥
五、真空度 112
六、冷凍干燥操作步驟 112
第六節(jié) 重組蛋白產(chǎn)品的穩(wěn)定性觀察 113
一、觀測樣品 114
二、觀測條件 114
三、測定項目 115
四、觀察時間 116
五、運輸穩(wěn)定性研究 116
六、結(jié)果的分析 116
七、標(biāo)示 117
八、名詞解釋 117
九、重組人尿激酶原穩(wěn)定性觀察 117
第五章 目標(biāo)蛋白產(chǎn)晶質(zhì)量檢測 121
第一節(jié) 目標(biāo)蛋白純度和生物活性檢測 121
一、目標(biāo)蛋白定量測定 121
二、目標(biāo)蛋白產(chǎn)品的純度檢測 126
三、目標(biāo)蛋白分子質(zhì)量測定 129
四、目標(biāo)蛋白生物活性測定 131
五、目標(biāo)蛋白等電點測定 132
第二節(jié) 重組蛋白中宿主細(xì)胞殘留物檢測 135
一、目標(biāo)蛋白產(chǎn)品中宿主細(xì)胞蛋白殘留量檢測 135
二、目標(biāo)蛋白產(chǎn)品中宿主細(xì)胞殘留DNA檢測 140
一、目標(biāo)蛋白產(chǎn)品中牛血清蛋白殘留量檢測 141
四、重組目標(biāo)蛋白產(chǎn)品中熱原值檢測 143
五、重組蛋白純化工藝中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)檢測 147
六、基因重組蛋白藥品報送國家食品藥品檢定研究院檢驗 148
七、工程細(xì)胞株和細(xì)胞庫的質(zhì)量控制 152
第六章 重組蛋白的結(jié)構(gòu)分析與鑒定 158
第一節(jié) 重組蛋白肽圖分析 158
一、重組人干擾素α1b的膚圖分析 158
二、液質(zhì)聯(lián)用分析重組人白細(xì)胞介素- 11的肽圖 159
第二節(jié) 重組蛋自糖基定位和糖鏈組成分析 161
一、糖鏈的釋放 161
二、氣相色譜法測定重組蛋白的糖鏈組成 164
第三節(jié) 重組蛋白氨基酸分析 165
一、目標(biāo)蛋白的水解 165
二、目標(biāo)蛋白的氨基酸分析 168
第四節(jié) 重組蛋白圓二色性光譜分析和紫外光譜分析 183
一、圓二色譜分析原理 183
二、圓二色性尤譜實驗步驟 185
三、試驗結(jié)果 185
四、蛋白質(zhì)紫外吸收光譜測定 186
第五節(jié) 重組蛋白的免疫原檢測 187
一、材料與方法 187
二、實驗步驟 187
三、聚丙烯眈滕凝肢的配制 188
四、轉(zhuǎn)膜 189
五、凝肢圖像分析 190
第七章 重組基因工程藥物的藥效學(xué)研究 191
一、動物種屬/模型的選擇 191
二、給藥劑量的設(shè)置 192
三、人源重組蛋白在實驗動物體內(nèi)的免疫原性 193
四、毒代動力學(xué)研究 194
五、重組人尿激酶尿的藥效學(xué)試驗 196
六、rhPro-UK對豬冠狀動腺血栓的溶栓作用 198
第八章 基因重組藥物的臨床前安全評價 201
第一節(jié) 基因重組藥物急性毒性試驗 201
一、喝齒類動物單次給藥的急性毒性試驗 201
二、非嗤齒類動物的急性毒性試驗(近似致死，劑量試驗) 203
三、說明 204
四、LD50的測定 204
第二節(jié) 重組蛋白藥品的長期毒性試驗 206
一、實驗動物 207
二、實驗動物飼養(yǎng)管理 207
三、試驗方法 207
四、說明 209
第二節(jié) 基因重組藥物的特殊毒'性試驗 211
一、微核試驗 211
二、致突變試驗 214
三、致癌試驗 217
四、致畸試驗 218
第四節(jié) 基因重組蛋自的一般藥理學(xué)研究 225
一、藥理學(xué)所用的生物材料 226
二、受試藥物 226
三、受試動物教 226
四、給藥劑量 226
五、重組人尿激酶原的一般藥理學(xué)研究 226
第九章 基因重組蛋白的藥物動力學(xué)研究 231
第一節(jié) 藥物動力學(xué)指導(dǎo)作用 231
一、藥物動力學(xué)隔室模型 232
二、藥物動力學(xué)參數(shù) 232
三、藥物動力學(xué)方程 234
四、藥物動力學(xué)尿藥數(shù)據(jù)法進行藥物動力學(xué)分析 234
五、藥物動力學(xué)以血藥濃度法建立的藥物動力學(xué)方程 235
六、靜脈滴垃和靜脈注射聯(lián)合用藥 236
七、藥物動力學(xué)統(tǒng)計矩法 237
第二節(jié) 藥物的吸收、分布、排泄 240
一、藥物的吸收 240
二、藥物動力學(xué)生物利用度和藥物動力學(xué)模型判刑方法 241
三、藥物的組織分布 243
四、藥物的排泄 243
五、藥物與血漿蛋白的結(jié)合 244
六、重組人尿激酶原(rhPro-UK)的藥物動力學(xué)研究 245
七、重組人尿激酶原的組織分布 249
第十章 基因重組生物藥物的注冊申報 252
第一部分治療用生物制品 252
一、注冊分類 252
二、申報資料項目 253
三、申報資料要求 254
四、申報資料說明 254
五、關(guān)于臨床試驗的說明 258
六、進行Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗的程序 258
七、進口治療用生物制品申報資料和要求 259
第二部分預(yù)防用生物制品 260
一、注冊分類 260
二、申報資料項目 261
三、申報資料的說明 262
四、關(guān)于臨床試驗的說明 264
五、進口預(yù)防用生物制品申報資料和要求 265
參考文獻(xiàn) 267
附錄1 研究者手冊{以重組人尿激酶原為范本) 273
一、新生物制品臨床研究申請表 273
二、中國食品藥品檢定研究院 274
三、重組人尿型纖溶酶原激活劑(rhPro-UK)的藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)、藥代動力學(xué)和藥放學(xué)的臨床前研究工作總結(jié) 277
四、有關(guān)尿激酶原(Pro-UK)的國內(nèi)外研究綜述 286
附錄 2 知情同意書新生物藥晶臨床試驗知情同意書的設(shè)計規(guī)范及范例 289
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