定 價：38 元
叢書名：中國科學院教材建設(shè)專家委員會規(guī)劃教材
- 作者：主編楊健, 胡為民, 楊繼文
- 出版時間：2015/8/1
- ISBN：9787030450517
- 出 版 社：科學出版社
- 中圖法分類：R37-33
- 頁碼：188
- 紙張：膠版紙
- 版次：4
- 開本：16K
《病原生物學與免疫學實驗》分為四部分，緒言主要介紹本門課程的教學目的和要求以及實驗室規(guī)則和實驗室生物安全；第一篇主要介紹三門課程的基本實驗，包括醫(yī)學免疫學、病原生物學和人體寄生蟲學基本實驗項目，內(nèi)容包括一些新的實驗技術(shù)；第二篇為綜合性和設(shè)計性實驗，該篇首先介紹了感染性疾病病原體的檢測方法和常用的用于病原體檢測的分子生物學實驗技術(shù)，其次羅列了經(jīng)典的感染性疾病臨床病例，目的是在病例討論基礎(chǔ)之上，圍繞病原體的檢測，綜合運用所學的基礎(chǔ)知識和基本實驗技能設(shè)計實驗；第三篇是創(chuàng)新性實驗相關(guān)內(nèi)容，主要介紹了國家創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)實驗項目的目的和要求以及項目申請書的格式和內(nèi)容，該篇主要針對一些對科學研究特別感興趣的同學。
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目 錄
緒言 (1)
一、 病原生物學與免疫學實驗?zāi)康暮鸵?1)
二、 實驗室生物安全(1)
三、 實驗室規(guī)章制度(2)
第一篇 基 本 實 驗第一章 免疫學基本實驗(3)
第一節(jié) 抗體的制備 (3)
一、 多克隆抗體(3)
實驗 1-1 多克隆抗體的制備 (3)
實驗 1-2 抗體的提取與純化(鹽析沉淀法)(4)
二、 單克隆抗體(5)
第二節(jié) 凝集實驗 (7)
一、 直接凝集實驗(7)
實驗 1-3 細菌的鑒定 (8)
實驗 1-4 人 ABO 血型鑒定 (9)
實驗 1-5 試管凝集實驗(肥達反應(yīng))(10)
二、 間接凝集實驗(11)
實驗 1-6 間接凝集實驗 (12)
實驗 1-7 間接凝集抑制實驗(妊娠實驗)(12)
實驗 1-8 協(xié)同凝集實驗 (13)
第三節(jié) 沉淀實驗 (14)
實驗 1-9 單向瓊脂擴散試驗 (15)
實驗 1-10 雙向瓊脂擴散試驗 (16)
實驗 1-11 免疫電泳 (17)
實驗 1-12 對流免疫電泳 (18)
實驗 1-13 火箭免疫電泳 (19)
第四節(jié)補體相關(guān)實驗 實驗 1-14 血清總補體活性測定 (21)
實驗 1-15 補體結(jié)合實驗 (22)
第五節(jié) 免疫細胞相關(guān)實驗 (26)
實驗 1-16 外周血單個核細胞的分離 (26)
實驗 1-17 巨噬細胞吞噬功能測定(大吞噬試驗)(28)
實驗 1-18 中性粒細胞吞噬功能測定(小吞噬試驗)(29)
實驗 1-19 NK 細胞活性測定 (30)
實驗 1-20 E 玫瑰花環(huán)試驗 (31)
實驗 1-21 間接免疫熒光技術(shù)檢測 T 細胞亞群(CD4)(33)
試驗 1-22 淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗 (34)
實驗 1-23 ELISPOT (35)
實驗 1-24 溶血空斑試驗 (38)
第六節(jié) 免疫標記技術(shù) (40)
一、 酶聯(lián)免疫吸附實驗(40)
實驗 1-25 免疫斑點實驗 (41)
實驗 1-26 間接 ELISA (42)
實驗 1-27 雙抗體夾心法 (44)
二、 膠體金標記技術(shù)(45)
實驗 1-28 膠體金的制備 (45)
實驗 1-29 膠體金標記蛋白的制備 (46)
實驗 1-30 膠體金標記技術(shù)常用方法 (47)
三、 熒光抗體標記技術(shù)(48)
實驗 1-31 熒光抗體制備技術(shù) (50)
實驗 1-32 間接法檢測抗核抗體 (50)
四、 放射免疫標記技術(shù)(51)
五、 化學發(fā)光免疫技術(shù)(52)
第七節(jié) 超敏反應(yīng) (53)
實驗 1-33 豚鼠過敏試驗 (53)
第二章 醫(yī)學微生物學基本實驗(54)
第一節(jié) 細菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 (54)
實驗 2-1 顯微鏡的使用 (54)
實驗 2-2 懸滴法觀察細菌的運動 (56)
實驗 2-3 革蘭染色法 (56)
實驗 2-4 細菌特殊結(jié)構(gòu)的染色法 (59)
第二節(jié) 細菌的人工培養(yǎng) (62)
一、 細菌的培養(yǎng)基(62)
實驗 2-5 細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備方法 (62)
二、 細菌的接種及生長現(xiàn)象觀察(65)
實驗 2-6 平板培養(yǎng)基接種法 (65)
實驗 2-7 試管培養(yǎng)基接種法 (70)
實驗 2-8 細菌計數(shù) (74)
第三節(jié) 細菌代謝產(chǎn)物的檢測 (79)
一、 細菌分解代謝產(chǎn)物的檢測(79)
實驗 2-9 碳水化合物代謝試驗 (79)
實驗 2-10 蛋白質(zhì)與氨基酸代謝試驗 (82)
實驗 2-11 碳源與氮源利用試驗 (84)
實驗 2-12 其他酶類試驗 (84)
二、 細菌合成代謝產(chǎn)物的檢測(85)
實驗 2-13 侵襲性酶的檢測 (85)
實驗 2-14 毒素的檢測 (87)
第四節(jié) 理化因素對細菌生長繁殖的影響 (90)
實驗 2-15 高壓蒸汽滅菌法 (90)
實驗 2-16 紫外線殺菌試驗 (91)
實驗 2-17 手指皮膚消毒試驗 (91)
實驗 2-18 藥物敏感試驗(紙片瓊脂擴散法)(92)
實驗 2-19 藥敏試驗(稀釋法)(93)
實驗 2-20 聯(lián)合藥物敏感試驗 (97)
第五節(jié) 細菌的遺傳變異 (98)
實驗 2-21 細菌 R 質(zhì)粒接合傳遞實驗 (98)
實驗 2-22 細菌鞭毛變異 (99)
第六節(jié) 特殊細菌的染色方法 (99)
實驗 2-23 抗酸染色法 (99)
實驗 2-24 異染顆粒染色法觀察棒狀桿菌 (100)
第七節(jié) 螺旋體觀察 (102)
實驗 2-25 Fontana 鍍銀染色法鏡檢鉤端螺旋體 (102)
實驗 2-26 剛果紅負染色法觀察奮森疏螺旋體 (103)
第八節(jié) 病毒學實驗 (104)
實驗 2-27 病毒蝕斑實驗 (104)
實驗 2-28 病毒血凝實驗及血凝抑制試驗 (105)
實驗 2-29 病毒中和實驗 (106)
第九節(jié) 真菌相關(guān)實驗 (108)
實驗 2-30 真菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 (108)
實驗 2-31 真菌的培養(yǎng) (109)
第三章 人體寄生蟲學基本實驗(112)
第一節(jié) 人體寄生蟲形態(tài)觀察 (112)
實驗 3-1 人體寄生蟲形態(tài)觀察 (112)
第二節(jié) 寄生蟲常用診斷技術(shù) (131)
實驗 3-2 糞便直接涂片法檢查蠕蟲卵 (131)
實驗 3-3 飽和鹽水漂浮法檢查糞便中鉤蟲卵 (132)
實驗 3-4 幼蟲孵化法 (133)
實驗 3-5 肛門試紙法 (135)
實驗 3-6 十二指腸分泌物檢查 (136)
實驗 3-7 陰道分泌物檢查 (137)
實驗 3-8 血液檢查 (138)
實驗 3-9 毛囊或皮脂腺(蠕形螨)檢查(140)
第三節(jié) 寄生蟲感染特殊免疫學檢測方法 (141)
實驗 3-10 皮內(nèi)試驗 (141)
實驗 3-11 血吸蟲環(huán)卵沉淀實驗 (142)
實驗 3-12 診斷弓形蟲感染的染色實驗 (143)
第二篇 綜合、設(shè)計型實驗第四章 感染性疾病的實驗室檢測概述(145)
第一節(jié) 細菌感染的實驗診斷 (145)
一、 標本的采集(145)
二、 細菌的檢測(146)
三、 細菌感染的血清學診斷(147)
四、 常見致病菌的鑒定流程(147)
第二節(jié) 病毒感染的實驗室診斷 (148)
一、 標本的采集與送檢(148)
二、 病毒的形態(tài)學檢查法(149)
三、 病毒抗原的直接檢出(149)
四、 檢測病毒核酸(150)
五、 病毒感染的血清學診斷(150)
六、 病毒分離培養(yǎng)(151)
第三節(jié) 真菌感染的實驗室診斷 (153)
一、 標本的采集(153)
二、 真菌的直接鏡檢(153)
三、 真菌的分離培養(yǎng)(154)
四、 血清學診斷(154)
五、 核酸雜交探針技術(shù)(154)
第四節(jié) 寄生蟲感染的實驗室診斷 (154)
一、 病原學檢查方法(154)
二、 常用于寄生蟲感染診斷的免疫學技術(shù)(156)
三、 寄生蟲的核酸檢測(156)
第五章 綜合、設(shè)計型實驗相關(guān)分子生物學實驗技術(shù)(158)
實驗 5-1 聚合酶鏈反應(yīng) (158)
實驗 5-2 Southern 雜交 (160)
實驗 5-3 蛋白質(zhì)印跡 (163)
第六章 感染性疾病病例分析及病原體檢測(169)
第三篇 創(chuàng)新性實驗相關(guān)內(nèi)容一、 創(chuàng)新性實驗選題原則(180)
二、 實施原則(180)
三、 對學生的要求(180)
四、 文獻檢索(181)
附一:國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃指南 (181)
一、 計劃目標(181)
二、 計劃內(nèi)容(181)
三、 參與高校(181)
四、 計劃管理(182)
五、 項目管理(182)
六、 學校工作(182)
附二:大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目申報書 (184)
填寫說明 (185)
參考文獻 (188)
彩圖
緒言
一、病原生物學與免疫學實驗?zāi)康暮鸵?br />
（1）通過實驗觀察和實驗操作，鞏固并加深對醫(yī)學免疫學和病原生物學基本理論知識的理解。
（2）掌握病原生物學與免疫學的基本操作技術(shù)；樹立牢固的無菌觀念，掌握生物安全的基本知識和病原生物學中常見的無菌操作技術(shù)，為以后的臨床操作奠定堅實的基礎(chǔ)。
（3）熟悉感染性疾病常用的診斷方法和手段，了解病原生物學和免疫學實驗技術(shù)的新進展。
（4）培養(yǎng)學生具有從事科學實驗的能力，能夠獨立觀察實驗結(jié)果、整理分析實驗資料、總結(jié)書寫實驗報告和論文的能力。培養(yǎng)學生一定的創(chuàng)新能力，能夠提出問題，分析問題并設(shè)計方案解決問題。培養(yǎng)學生嚴謹?shù)目茖W態(tài)度和作風，培養(yǎng)學生不僅具有獨立解決問題的能力，同時也培養(yǎng)學生團結(jié)協(xié)作精神。
二、實驗室生物安全
國家根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類（表0-1）：表0-1病原微生物生物危害的類別劃分類別劃分標準舉例一類能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物埃博拉病毒、沙粒病毒、天花病毒等二類能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物如結(jié)核分枝桿菌、布魯氏菌、圣路易斯腦炎病毒、朊粒等三類能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物乙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、沙門菌、志賀菌、梅毒螺旋體、葡萄球菌等四類在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物如枯草桿菌、犬肝炎病毒等一類、二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。
根據(jù)微生物實驗室開展工作的性質(zhì)、接觸的病原體生物危害程度、采取生物安全措施的不同分為4級（表0-2）：
表0-2病原微生物實驗室分級級別主要用途實驗條件一級從事基礎(chǔ)教學與研究，接觸四類生物危害微生物開放式工作臺和規(guī)范的微生物操作技術(shù)續(xù)表級別主要用途實驗條件二級從事實驗健康服務(wù)、診斷、研究、接觸三類生物危害微生物除了開放式長形工作臺還應(yīng)配置生物安全柜，實驗室應(yīng)有生物危害標記，操作人員應(yīng)身著防護服，有規(guī)范的病原微生物操作技術(shù)三級從事特殊診斷與服務(wù)，接觸二類生物危害微生物需要生物安全柜和其他操作所需的基本裝置，實驗室應(yīng)有生物危害標記，操作人員身著特殊防護服，規(guī)范的微生物操作技術(shù)，人員進入受限，實驗室內(nèi)有定向氣流四級從事危險病原體操作，接觸一類病原微生物應(yīng)有配套的生物安全柜，人員身著帶正壓的連衣褲，實驗室空氣經(jīng)過濾，配備帶雙門的高壓滅菌器，除了三級防護措施外，人員進入實驗室時，應(yīng)經(jīng)過密封的過渡艙，離開時應(yīng)經(jīng)風淋，生物廢棄物應(yīng)經(jīng)特殊處理
三、實驗室規(guī)章制度
病原生物學實驗的對象大多為病原微生物，有的具有一定的感染性，因此要求進入實驗室后必須嚴格遵守以下實驗室規(guī)則：
（1）每次進入實驗室必須穿白大褂，不必要的物品不得帶入實驗室，必須帶入的書籍和文具等應(yīng)放在實驗臺下的抽屜里，以免受到污染。
（2）實驗室內(nèi)禁止飲食、喝水、抽煙，不得高聲談笑或隨便走動，務(wù)必關(guān)閉手機鈴聲，上課期間不得使用手機。
（3）各種實驗物品應(yīng)按指定地點存放，用過的器材必須放入消毒缸內(nèi)，禁止隨意放于桌上及沖入水槽。
（4）須送培養(yǎng)箱培養(yǎng)的物品，應(yīng)做好標記后送到指定地點。
（5）實驗過程中發(fā)生差錯或意外事故時，應(yīng)立即報告老師，并在老師的指導下進行正確的處理，禁止隱瞞或擅自處理。如有傳染性的材料污染桌面、地面等，應(yīng)立即用規(guī)定濃度的消毒液浸泡污染部位，作用5～10min后方可抹去。如手被活菌污染也應(yīng)使用合適濃度的消毒液浸泡5～10min后，再以自來水反復(fù)沖洗。
（6）愛護室內(nèi)儀器設(shè)備，嚴格按照儀器的操作規(guī)則使用，尤其是顯微鏡，使用油鏡頭后必須擦凈鏡油。節(jié)約使用實驗材料，不慎損壞了器材等，應(yīng)主動報告老師并進行相應(yīng)清理。
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