內(nèi)容總覽/1
總論/2
一、分子生物學(xué)技術(shù)/2
二、分子醫(yī)學(xué)的內(nèi)容/3
三、分子醫(yī)學(xué)的社會(huì)、倫理問題/5
四、分子醫(yī)學(xué)在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展中的意義/6
第一篇核酸實(shí)驗(yàn)技術(shù)
第一章核酸的制備/11
第一節(jié)基因組DNA的提取與純化/11
一、基因組DNA提取的基本過程/11
二、基因組DNA提取的基本策略/11
三、苯酚-氯仿抽提法提取基因組DNA的實(shí)驗(yàn)方案/13
四、Chelex-100法提取基因組DNA的實(shí)驗(yàn)方案/15
第二節(jié)RNA的提取和cDNA合成/16
一、RNA提取和cDNA合成的基本概念/16
二、RNA提取的基本策略/16
三、cDNA合成的基本策略/17
四、RNA提取和cDNA合成的實(shí)驗(yàn)方案/18
第二章聚合酶鏈反應(yīng)/22
第一節(jié)聚合酶鏈反應(yīng)的基本原理/22
一、PCR的基本概念/22
二、PCR技術(shù)的基本原理/22
第二節(jié)常用PCR技術(shù)的實(shí)驗(yàn)策略/23
一、PCR技術(shù)的主要類型/23
二、基礎(chǔ)PCR技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方案/25
三、RT-PCR技術(shù)的實(shí)驗(yàn)策略/26
四、PCR實(shí)驗(yàn)的影響因素及討論/26
五、PCR常見問題及異常結(jié)果的分析/28
第三節(jié)實(shí)時(shí)熒光定量PCR/30
一、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的基本概念/30
二、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的基本原理和策略/30
三、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方案/33
第三章核酸的檢測(cè)/37
第一節(jié)DNA的凝膠電泳檢測(cè)/37
一、電泳的基本概念/37
二、瓊脂糖凝膠電泳的原理和基本策略/38
三、聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)DNA/43
第二節(jié)分光光度分析法/44
一、分光光度分析法的原理/44
二、分光光度法檢測(cè)DNA含量/46
三、分光光度法檢測(cè)RNA濃度/46
第四章核酸雜交與核酸探針/47
第一節(jié)核酸雜交與核酸探針的基本原理/47
一、核酸雜交與核酸探針的基本概念/47
二、常用的核酸雜交方法/48
三、核酸探針的種類/48
四、核酸探針的標(biāo)記物/48
第二節(jié)核酸探針的合成與標(biāo)記/49
一、雙鏈DNA探針/49
二、單鏈DNA探針/51
三、RNA探針/56
第三節(jié)雜交常規(guī)實(shí)驗(yàn)/56
一、原位雜交法進(jìn)行重組質(zhì)粒的篩選/56
二、Southern雜交/57
三、Northern雜交/60
第五章基因克隆/62
第一節(jié)目的基因的獲取和基因載體的制備/63
一、目的基因獲取的基本策略/63
二、基因載體的基本概念/64
三、質(zhì)粒載體的制備/68
第二節(jié)切割目的基因和基因載體/75
一、限制性內(nèi)切酶的基本概念/75
二、酶切反應(yīng)的體系和基本策略/77
三、酶切反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方案/78
第三節(jié)目的基因和載體的體外連接/80
一、目的基因和載體重組的基本策略/80
二、目的基因和載體連接的工具酶/82
三、目的基因和載體連接的實(shí)驗(yàn)方案/84
四、注意事項(xiàng)及常見問題分析/85
第四節(jié)重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞/87
一、轉(zhuǎn)化的基本概念/87
二、轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的基本策略/87
三、原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)方案/89
四、真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)方案/92
第五節(jié)重組體陽(yáng)性克隆的篩選/93
一、陽(yáng)性克隆篩選的基本策略/93
二、重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌及藍(lán)白篩選的實(shí)驗(yàn)方案/96
三、真核轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選的實(shí)驗(yàn)方案/98
第六節(jié)外源基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)/100
一、概論/100
二、宿主細(xì)胞/100
三、表達(dá)載體/100
四、提高目的基因表達(dá)水平的基本策略/101
五、表達(dá)產(chǎn)物檢測(cè)的基本策略/103
六、表達(dá)蛋白質(zhì)的分離純化/104
七、基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)方案/104
第二篇蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)
第六章蛋白質(zhì)樣品的制備/109
第一節(jié)樣品的處理/109
一、原材料的選擇和預(yù)處理/109
二、細(xì)胞破碎的實(shí)驗(yàn)策略/109
第二節(jié)蛋白質(zhì)的提取和純化/111
一、蛋白質(zhì)提取的實(shí)驗(yàn)策略/111
二、蛋白質(zhì)分離純化的實(shí)驗(yàn)策略/112
三、蛋白質(zhì)濃縮、干燥和保存的實(shí)驗(yàn)策略/115
第七章蛋白質(zhì)定量檢測(cè)技術(shù)/117
第一節(jié)紫外吸收測(cè)定法/117
第二節(jié)Folin-酚試劑法/119
第三節(jié)考馬斯亮藍(lán)法/121
第四節(jié)二喹啉甲酸檢測(cè)法/122
第八章蛋白質(zhì)的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳/124
第一節(jié)SDS-PAGE的原理和基本策略/124
一、聚丙烯酰胺凝膠的制備/124
二、SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)/126
第二節(jié)SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方案/128
一、SDS-PAGE的實(shí)驗(yàn)方案/128
二、用考馬斯亮藍(lán)對(duì)SDS-聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行染色的實(shí)驗(yàn)方案/131
三、用銀鹽對(duì)SDS-聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行染色的實(shí)驗(yàn)方案/131
四、SDS-聚丙烯酰胺凝膠的干燥/132
五、注意事項(xiàng)及常見問題分析/132
第九章蛋白質(zhì)的免疫印跡技術(shù)/134
第一節(jié)免疫印跡技術(shù)的基本原理/134
第二節(jié)免疫印跡技術(shù)的基本策略/135
一、蛋白質(zhì)的SDS-PAGE/135
二、蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移至膜/135
三、印跡膜的蛋白染色/137
四、印跡膜的免疫檢測(cè)/138
五、免疫印跡后膜的重復(fù)使用/141
六、注意事項(xiàng)及常見問題分析/141
第十章蛋白質(zhì)層析技術(shù)/144
第一節(jié)層析的基本理論和基本操作/144
一、層析的基本概念/144
二、塔板理論/145
三、層析法的分類/146
四、柱層析的基本裝置及基本操作/147
第二節(jié)凝膠層析/148
一、凝膠層析的基本原理/148
二、葡聚糖凝膠層析/151
三、凝膠層析的應(yīng)用/152
四、葡聚糖凝膠層析純化血清-球蛋白的實(shí)驗(yàn)方案/153
第三節(jié)離子交換層析/154
一、離子交換層析的基本原理/155
二、離子交換層析的基本操作/158
三、離子交換層析的應(yīng)用/159
四、離子交換層析法分離血清蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方案/159
第四節(jié)親和層析/161
一、親和層析的基本原理/161
二、親和層析的載體/162
三、親和層析的間隔臂分子/163
四、親和層析的配體/163
五、親和層析的基本操作及注意事項(xiàng)/164
第五節(jié)高效液相色譜法/165
一、高效液相色譜法的基本原理/165
二、高效液相色譜的固定相和流動(dòng)相/167
三、高效液相色譜的類型與應(yīng)用/167
第三篇免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)
第十一章淋巴細(xì)胞分離與E玫瑰花環(huán)形成試驗(yàn)/171
第十二章免疫血清制備/175
第十三章血型鑒定/178
第十四章酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)/181
第十五章免疫印跡/185
第十六章酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)結(jié)核特異性T細(xì)胞干擾素釋放/187
第十七章間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)抗核抗體/191
第十八章T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)/194
第十九章T淋巴細(xì)胞亞群及胞內(nèi)干擾素的流式細(xì)胞檢測(cè)/197
第四篇分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)
第二十章口腔黏膜細(xì)胞基因組DNA的制備/203
第二十一章PCR檢測(cè)人ApoBVNTR等位基因多態(tài)性/207
第二十二章單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析法檢測(cè)人HLA等位基因多態(tài)性/211
第二十三章SDS堿裂解法提取質(zhì)粒DNA/216
第二十四章重組質(zhì)粒的酶切鑒定及紫外分光光度法檢測(cè)DNA含量/221
第二十五章重組DNA的轉(zhuǎn)化與篩選/225
第二十六章圓盤電泳/230
第二十七章蛋白質(zhì)的離子交換層析、紫外分光光度法檢測(cè)蛋白質(zhì)含量/234
第二十八章葡聚糖凝膠層析實(shí)驗(yàn)/238
第五篇分子生物學(xué)前沿技術(shù)
第二十九章DNA及RNA序列分析技術(shù)/243
第一節(jié)DNA序列分析技術(shù)/243
一、第二代測(cè)序技術(shù)/243
二、第三代測(cè)序技術(shù)/246
三、單細(xì)胞全基因組測(cè)序技術(shù)/247
四、甲基化修飾的檢測(cè)技術(shù)/250
第二節(jié)RNA序列分析技術(shù)/251
一、以第二代測(cè)序技術(shù)為核心的RNA測(cè)序/252
二、RNA分子直接測(cè)序/253
三、基因表達(dá)常用數(shù)據(jù)庫(kù)/253
第三十章蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析技術(shù)/256
第一節(jié)蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)/256
一、蛋白質(zhì)的分離方法/256
二、活性測(cè)試/259
第二節(jié)蛋白質(zhì)譜分析技術(shù)/259
一、蛋白質(zhì)譜技術(shù)/259
二、利用蛋白質(zhì)譜可獲得的結(jié)構(gòu)信息/262
第三節(jié)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)分析技術(shù)/263
一、晶體獲得/263
二、結(jié)構(gòu)解析技術(shù)/263
第四節(jié)蛋白質(zhì)的生物信息學(xué)分析工具和數(shù)據(jù)庫(kù)介紹/264
一、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)/264
二、UniProt/269
三、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)可視化和分析軟件/272
第三十一章蛋白質(zhì)功能研究技術(shù)/275
第一節(jié)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)互作分析技術(shù)/275
一、免疫共沉淀技術(shù)/275
二、酵母雙雜交技術(shù)/276
三、免疫熒光技術(shù)/277
第二節(jié)蛋白質(zhì)與小分子互作分析技術(shù)/278
一、熒光偏振免疫分析法/278
二、等溫量熱滴定儀/278
三、微量熱泳動(dòng)技術(shù)/278
第三節(jié)蛋白質(zhì)與核酸分子互作分析技術(shù)/278
一、電泳遷移率變動(dòng)分析/278
二、染色質(zhì)免疫共沉淀/279
第四節(jié)蛋白質(zhì)組學(xué)/280
一、蛋白質(zhì)組學(xué)研究?jī)?nèi)容/280
二、蛋白質(zhì)組學(xué)常用技術(shù)/281
第三十二章基因編輯技術(shù)/285
第一節(jié)鋅指核酸酶技術(shù)/285
一、鋅指核酸酶的結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制/285
二、鋅指核酸酶技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用/286
三、鋅指核酸酶技術(shù)的優(yōu)勢(shì)與不足/287
第二節(jié)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶技術(shù)/287
一、TALEN技術(shù)/287
二、TALEN技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用/288
三、TALEN技術(shù)的優(yōu)勢(shì)與不足/288
第三節(jié)規(guī)律間隔成簇短回文重復(fù)序列/289
一、CRISPR/Cas系統(tǒng)/289
二、CRISPR/Cas系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和機(jī)制/289
三、CRISPR/Cas系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于基因編輯/291
第四節(jié)RNA干擾/292
一、RNA干擾現(xiàn)象/292
二、RNA干擾的機(jī)制/292
三、RNA干擾的應(yīng)用/293
第三十三章代謝組學(xué)的技術(shù)與應(yīng)用/296
第一節(jié)代謝組學(xué)技術(shù)/297
一、核磁共振技術(shù)/297
二、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)/297
第二節(jié)代謝組學(xué)的應(yīng)用/300
一、新生兒遺傳代謝病篩查/300
二、新型生物標(biāo)志物的開發(fā)/301
三、腫瘤早期診斷和治療/301
四、藥物療效及毒性評(píng)價(jià)/302
五、其他/302
第六篇分子生物學(xué)技術(shù)數(shù)據(jù)庫(kù)
第三十四章分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基本要求/307
一、實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器及設(shè)施/307
二、離心機(jī)室/310
三、分析儀器室/310
四、核素實(shí)驗(yàn)室/310
五、細(xì)胞培養(yǎng)室/311
六、暗室/311
七、冷室/311
第三十五章分子生物學(xué)常用儀器/312
第一節(jié)離心機(jī)/312
一、離心機(jī)的基本原理和結(jié)構(gòu)/312
二、離心方法與離心機(jī)的使用/316
三、離心機(jī)的發(fā)展與新功能的應(yīng)用/318
第二節(jié)分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀及超微量分光光度計(jì)/319
一、分光光度計(jì)的基本原理和組成/320
二、分光光度法的應(yīng)用及引起誤差的因素/321
三、酶標(biāo)儀/323
四、超微量生物檢測(cè)儀/325
五、分光光度計(jì)、超微量生物檢測(cè)儀的發(fā)展和應(yīng)用展望/326
第三節(jié)高效液相色譜儀/327
一、高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)和原理/327
二、高效液相色譜儀的操作方法與應(yīng)用/331
三、高效液相色譜的發(fā)展和應(yīng)用展望/332
第四節(jié)自動(dòng)化電泳儀器/332
一、電泳儀器的基本結(jié)構(gòu)和工作原理/333
二、常用的電泳方法與操作/334
三、電泳儀器的發(fā)展和應(yīng)用展望/336
第五節(jié)PCR基因擴(kuò)增儀/337
一、PCR基因擴(kuò)增儀的基本原理和結(jié)構(gòu)/337
二、PCR基因擴(kuò)增儀的發(fā)展和應(yīng)用展望/338
第六節(jié)全自動(dòng)DNA序列測(cè)定儀和全自動(dòng)核酸提取儀/342
一、DNA序列測(cè)定儀器的基本原理和結(jié)構(gòu)/343
二、全自動(dòng)核酸提取儀/344
第七節(jié)生物分子圖像分析系統(tǒng)/345
一、生物分子圖像分析系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)和原理/345
二、生物分子圖像分析系統(tǒng)的發(fā)展和應(yīng)用展望/347
第八節(jié)生物芯片相關(guān)儀器/347
一、生物芯片相關(guān)儀器介紹/347
二、生物芯片的發(fā)展和應(yīng)用展望/349
第九節(jié)生物質(zhì)譜儀/350
一、生物質(zhì)譜儀的基本原理和結(jié)構(gòu)/350
二、生物質(zhì)譜儀的發(fā)展和應(yīng)用展望/351
第十節(jié)流式細(xì)胞儀/352
一、流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理/352
二、流式細(xì)胞儀的操作方法與注意事項(xiàng)/353
三、流式細(xì)胞儀的發(fā)展和應(yīng)用展望/355
第十一節(jié)細(xì)胞成像系統(tǒng)/355
一、細(xì)胞成像系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)和原理/356
二、細(xì)胞成像系統(tǒng)的功能特點(diǎn)及使用/356
三、細(xì)胞成像系統(tǒng)的發(fā)展和應(yīng)用展望/357
附錄分子生物學(xué)技術(shù)常用數(shù)據(jù)表
附錄一分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照/360
附錄二遺傳密碼表/361
附錄三各種pH值的Tris緩沖液的配制/361
附錄四染料在非變性聚丙烯酰胺凝膠中的遷移速度/362
附錄五染料在變性聚丙烯酰胺凝膠中的遷移速度/362
附錄六瓊脂糖凝膠濃度與線性DNA分辨范圍/363
附錄七溫度對(duì)50mmol/LTris-HCl液pH值的影響/363
附錄八常見的市售酸堿的濃度/364
附錄九分子克隆常見緩沖液/365
附錄十磷酸緩沖液/365
附錄十一常見的電泳緩沖液/366
附錄十二凝膠加樣緩沖液/366
附錄十三常見溶液的配制/367