第一章 文獻(xiàn)綜述 1 1.銀杏植株的性別鑒別研究 1 1.1形態(tài)學(xué)標(biāo)記 1 1.2細(xì)胞學(xué)標(biāo)記 2 1.3生物化學(xué)標(biāo)記 2 1.4分子標(biāo)記 2 2.銀杏花粉的研究 3 2.1雄花的特點(diǎn) 3 2.2花粉的發(fā)育 4 2.3花粉的形態(tài)特征 5 2.4花粉的結(jié)構(gòu)特征 5 2.5銀杏花粉的應(yīng)用研究 6 2.5.1有效成分的概況 6 2.5.2有效成分的提取與分析 7 2.5.3花粉的開發(fā) 8 3.銀杏種質(zhì)資源遺傳多樣性的分子標(biāo)記研究 8 3.1種質(zhì)資源的遺傳圖譜構(gòu)建 9 3.2 RAPD分子標(biāo)記 9 3.3 RFLP分子標(biāo)記 10 3.4 AFLP分子標(biāo)記 10 3.5 ISSR分子標(biāo)記 11 4.銀杏有效成分代謝與變化研究 12 4.1銀杏的植物學(xué)與經(jīng)濟(jì)學(xué)性狀 12 4.2有效成分的代謝特點(diǎn) 13 4.2.1有效成分的種類 13 4.2.2有效成分的代謝途徑 15 4.3銀杏葉片黃酮含量的變化規(guī)律 16 4.4 銀杏雄株有效成分的提取、分離和檢測(cè)研究 17 4.4.1葉片黃酮類化合物的提取 17 4.4.2葉片黃酮類化合物含量的測(cè)定 19 4.4.3 銀杏酸的提取、分離、檢測(cè) 20 4.5有效成分的開發(fā)利用研究 21 4.5.1黃酮類化合物的藥用功效 21 4.5.2 銀杏酸的生理活性作用 24 5.本研究的意義和主要內(nèi)容 26 5.1本研究的重要意義 26 5.2本研究的主要內(nèi)容 27 第二章 銀杏雄株資源多樣性的孢粉學(xué)研究 28 1. 材料與方法 30 1.1試驗(yàn)材料 30 1.2花粉粒形態(tài)特征與結(jié)構(gòu)的觀測(cè) 30 1.3銀杏雄株花粉形態(tài)特征的聚類分析 31 1.4數(shù)據(jù)分析方法 31 2 結(jié)果與分析 31 2.1花粉粒的形態(tài)大小觀測(cè) 31 2.2花粉壁雕紋特征與差異 31 2.3 花粉粒形態(tài)特征的聚類分析 32 2.4 花粉壁結(jié)構(gòu)的TEM觀測(cè)及其雄株類型間的差異 34 3 討論 37 3.1銀杏雄株多樣性孢粉學(xué)研究的可行性 37 3.2花粉粒的外觀形態(tài)結(jié)構(gòu)特征 38 3.3 花粉外壁表面紋飾的多樣性 38 3.4 花粉形態(tài)結(jié)構(gòu)的系統(tǒng)聚類分析 39 圖 版 40 第三章 銀杏雄株資源多樣性的ISSR標(biāo)記分析 48 1.材料與方法 50 1.1 試驗(yàn)材料 50 1.2 主要儀器和設(shè)備 50 1.3 主要藥品和試劑 50 1.4 銀杏雄株葉片基因組DNA的提取與純化 50 1.5 銀杏基因組DNA質(zhì)量的檢測(cè) 51 1.6 PCR擴(kuò)增 51 1.7 ISSR引物的篩選 52 1.8 統(tǒng)計(jì)分析 53 2. 結(jié)果分析 53 2.1葉片基因組DNA提取與質(zhì)量檢測(cè) 53 2.2 ISSR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化與建立 55 2.2.1 正交設(shè)計(jì)的直觀分析 55 2.2.2 試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析 55 2.2.3 退火溫度的確定 58 2.3 銀杏雄株ISSR標(biāo)記的引物篩選 59 2.4 銀杏雄株ISSR標(biāo)記的聚類分析 61 2.5 銀杏雄株遺傳多樣性的比較分析 62 2.6 銀杏雄株群體遺傳多樣性的比較分析 62 2.7 銀杏雄株群體間的遺傳分化分析及聚類分析 63 3.討論 65 3.1 ISSR-PCR反應(yīng)條件對(duì)研究結(jié)果的影響 65 3.2 銀杏雄株ISSR標(biāo)記的聚類分析 66 3.3 銀杏雄株種質(zhì)資源的遺傳多樣性分析 66 3.4 三個(gè)銀杏雄株群體的遺傳分化分析 67 附錄 68 第四章 銀杏雄株葉片黃酮類化合物含量的分析 71 1. 材料與方法 73 1.1 試驗(yàn)材料 73 1.2儀器與試劑 73 1.2.1儀器 73 1.2.2試劑 74 1.3黃酮類化合物的提取 74 1.3.1提取體系的優(yōu)化和建立 74 1.3.2黃酮類化合物的提取 74 1.4黃酮類化合物的HPLC檢測(cè) 75 1.5雄株相關(guān)植物學(xué)性狀的測(cè)定 76 2結(jié)果與分析 76 2.1黃酮類化合物提取最佳體系的篩選 76 2.1.1 水溶液黃酮類化合物的正交設(shè)計(jì)結(jié)果 76 2.1.2乙醇溶液提取黃酮類化合物的正交設(shè)計(jì)結(jié)果 76 2.1.3 不同溶劑提取的結(jié)果比較 78 2.2銀杏雄株葉片黃酮含量分析 79 2.2.1不同采葉期黃酮類化合物的含量 79 2.2.2不同株系葉片黃酮苷元含量的比較 81 2.2.3不同株系總黃酮含量的比較 82 2.2.4優(yōu)良雄株株系的選擇 83 2.3銀杏雄株葉片黃酮類化合物含量的相關(guān)性狀分析 83 3討論 84 3.1 開展銀杏雄性株系葉片指紋圖譜研究的意義 84 3.2葉片黃酮苷元及總黃酮含量的變化規(guī)律 84 3.3葉片總黃酮含量?jī)?yōu)良株系的選擇 85 附：銀杏葉片高含量黃酮類化合物優(yōu)選雄株的HPLC色譜圖： 86 第五章 銀杏花粉黃酮類化合物含量的分析 90 1. 材料與方法 91 1.1 試驗(yàn)材料 91 1.2儀器與試劑 91 1.2.1儀器 91 1.2.2試劑 92 1.3花粉中黃酮類化合物的提取 92 1.3.1花粉的破壁 92 1.3.2黃酮類化合物的提取 92 1.4黃酮類化合物的HPLC檢測(cè) 92 1.5雄花形態(tài)指標(biāo)、花粉性狀指標(biāo)的測(cè)定 92 2. 結(jié)果與分析 93 2.1 黃酮含量的分析 93 2.1.1 不同株系黃酮苷元含量的比較 93 2.1.2 不同株系總黃酮含量的比較 96 2.1.3 優(yōu)良雄株株系的選擇 96 2.2 葉片和花粉中黃酮苷元及總黃酮含量的比較 97 2.3銀杏雄株花粉黃酮類化合物含量的相關(guān)性狀分析 97 3討論 98 3.1 開展銀杏花粉黃酮苷元指紋圖譜研究的意義 98 3.2 花粉的破壁方法 98 3.3花粉中主要黃酮苷元的含量 99 附：銀杏花粉高含量黃酮類化合物部分優(yōu)選雄株的HPLC色譜圖： 100 第六章　銀杏雄株葉片銀杏酸含量的分析 104 1.材料與方法 106 1.1供試材料 106 1.2儀器與試劑 106 1.2.1儀器 106 1.2.2試劑 106 1.3銀杏雄株銀杏酸類化合物的UV檢測(cè)方法 106 1.3.1銀杏酸的提取分離 106 1.3.2銀杏酸類化合物的UV檢測(cè) 107 2結(jié)果與分析 107 2.1不同采葉期葉片中銀杏酸的含量 107 2.2銀杏雄株不同類枝條著生的葉片中酚酸類成分含量的差異 107 2.3銀杏酸含量較低的雄株優(yōu)選 107 3討論 109 3.1葉片銀杏酸含量的檢測(cè)分析方法 109 3.2葉片銀杏酸的含量變化研究 111 第七章 本研究的主要結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn) 112 1. 本研究的主要結(jié)論 112 2. 本研究的創(chuàng)新點(diǎn) 114 3. 本研究的下一步打算： 114 參考文獻(xiàn) 115 致 謝 133