目錄
前言
第一章 組織樣本制備技術(shù) 1
第一節(jié) 組織樣本采集 1
一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法 1
二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的解剖 2
三、取樣方法及注意事項(xiàng) 3
四、細(xì)胞樣本采集 4
第二節(jié) 標(biāo)本的固定 4
一、固定的目的 4
二、固定的對象 5
三、常用的固定劑 5
四、組織固定方法 9
五、培養(yǎng)細(xì)胞的固定方法 10
六、固定時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng) 10
七、組織固定后的洗滌 11
第二章 石蠟切片制作技術(shù) 12
第一節(jié) 組織固定后的處理 12
一、組織塊修整 12
二、洗滌 12
三、脫水 13
四、透明 15
五、透蠟（浸蠟）與包埋 16
第二節(jié) 石蠟切片 18
一、石蠟切片前的準(zhǔn)備 18
二、切片方法 19
三、切片中容易出現(xiàn)的問題、原因及解決方法 21
第三章 冰凍切片制作技術(shù) 22
第一節(jié) 冰凍切片的取樣及處理 22
一、樣品的處理 22
二、組織的速凍 22
第二節(jié) 冰凍切片 23
一、恒溫冷凍切片機(jī) 23
二、切片方法及步驟 24
三、冰凍切片固定液選擇 25
四、冰凍切片染色方法 25
五、冰凍切片的優(yōu)缺點(diǎn)和注意事項(xiàng) 25
第四章 組織染色技術(shù) 28
第一節(jié) 染色的原理 28
一、染色的發(fā)展 28
二、染料 28
三、染色的原理 30
第二節(jié) 染色方法 32
一、整體染色法 32
二、組織塊染色法 32
三、蠟帶染色法 32
四、切片染色法 32
五、涂片染色法 32
六、活體染色法 33
第三節(jié) 蘇木精-伊紅染色法 33
一、蘇木精-伊紅染色的基本原理 33
二、蘇木精-伊紅染色的基本方法 33
三、二甲苯在H-E染色中的作用 35
四、乙醇在H-E染色中的作用 36
五、水洗的作用 36
六、分化和藍(lán)化 37
七、切片制作中出現(xiàn)的問題、原因及解決方法 37
第四節(jié) 特殊染色方法 38
一、瑞特染色法 38
二、巴氏染色法 38
三、邁-格-吉染色方法 39
第五章 組織化學(xué)技術(shù) 40
第一節(jié) 蛋白質(zhì)和氨基酸的組織化學(xué)技術(shù) 40
一、蛋白質(zhì)的組成及分類 40
二、蛋白質(zhì)和氨基酸的染色方法 41
第二節(jié) 脂類（脂質(zhì)）的組織化學(xué)技術(shù) 43
一、鋨酸法顯示非飽和脂質(zhì) 43
二、蘇丹黑B染色法顯示脂類 44
三、Fischler脂肪酸染色法 44
四、Daddi酒精性蘇丹Ⅲ法 44
五、高氯酸-萘醌（PAN）法顯示膽固醇 45
六、酸性蘇木紅法顯示磷脂 45
第三節(jié) 酶組織化學(xué)技術(shù) 46
一、酶的分類 46
二、酶的組織化學(xué)反應(yīng)法 47
三、影響顯示酶的因素 47
四、水解酶的顯示 48
五、膽堿酯酶的顯示 49
六、氧化酶及過氧化物酶 51
七、Sato顯示骨髓、血液涂片的過氧化物酶法 52
八、琥珀酸脫氫酶 52
第四節(jié) 多糖組織化學(xué)技術(shù) 52
一、過碘酸-Schiff反應(yīng) 52
二、阿爾辛藍(lán)-PAS法 53
第五節(jié) 核酸組織化學(xué)技術(shù) 54
一、Feulgen反應(yīng)顯示脫氧核糖核酸 54
二、甲基綠-派洛寧顯示脫氧核糖核酸和核糖核酸 54
三、核酸熒光染色 55
第六節(jié) 凝集素組織化學(xué)技術(shù) 59
一、凝集素的標(biāo)記物 59
二、染色步驟 59
第七節(jié) 生物胺熒光組織化學(xué)技術(shù) 61
一、Falck-Hillarp甲醛誘發(fā)熒光法 61
二、乙醛酸誘發(fā)生物單胺熒光法 62
三、鄰苯二醛顯示組胺熒光法 62
第六章 免疫組織化學(xué)技術(shù) 64
第一節(jié) 免疫組織化學(xué)技術(shù)的原理、分類和發(fā)展 64
一、免疫組織化學(xué)技術(shù)的基本原理 64
二、免疫組織化學(xué)技術(shù)的分類 65
三、免疫組織化學(xué)的特點(diǎn) 65
四、免疫組織化學(xué)的發(fā)展 66
第二節(jié) 免疫組織化學(xué)標(biāo)本制備 68
一、取樣 69
二、固定 69
三、脫水、浸蠟及包埋 70
四、切片 70
五、烤片 71
六、標(biāo)本防脫落技術(shù) 71
七、對照試驗(yàn) 71
八、抗原修復(fù) 71
九、免疫組織化學(xué)結(jié)果的判斷 73
第三節(jié) 免疫熒光組織化學(xué)技術(shù) 74
一、直接法 74
二、間接法 74
三、補(bǔ)體法 75
四、雙重標(biāo)記法 75
五、非特異性熒光染色的抑制或消除 76
第四節(jié) 免疫酶組織化學(xué)技術(shù) 77
一、酶標(biāo)記抗體法（酶標(biāo)法） 77
二、非標(biāo)記抗體酶法 77
三、免疫酶雙標(biāo)記法 80
第五節(jié) 親和免疫組織化學(xué)技術(shù) 80
一、親和免疫組織化學(xué)技術(shù)的基本原理 81
二、親和免疫組織化學(xué)技術(shù)的基本方法 81
三、親和免疫組織化學(xué)技術(shù)的操作步驟 82
第六節(jié) 免疫金組織化學(xué)技術(shù) 83
一、免疫膠體金技術(shù) 83
二、蛋白A膠體金技術(shù) 84
三、免疫金銀染色 85
第七節(jié) 免疫組織化學(xué)增敏方法 86
一、多聚螯合物酶法 86
二、催化信號放大系統(tǒng) 87
第八節(jié) 雙重或多重免疫組織化學(xué)染色技術(shù) 88
一、基本染色形式 89
二、阻斷法單酶或雙重酶免疫組織化學(xué)染色 90
三、阻斷法雙重免疫熒光組織化學(xué)染色 91
四、非阻斷法單酶或雙酶雙重免疫組織化學(xué)染色 91
五、非阻斷法雙重免疫熒光組織化學(xué)染色 92
六、其他類型組合的雙重免疫染色 92
七、三重免疫染色 93
第九節(jié) 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定及注意事項(xiàng) 93
一、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判斷原則 93
二、非特異性染色 94
三、常見問題與處理方法 94
第七章 原位雜交組織化學(xué)技術(shù) 99
第一節(jié) 原位雜交組織化學(xué)的基本原理 99
一、核酸的分子結(jié)構(gòu) 99
二、核酸的理化性質(zhì) 100
三、核酸分子雜交的基本原理 101
四、核酸探針的種類 101
五、核酸分子雜交的類型 102
第二節(jié) 原位雜交組織化學(xué)技術(shù)的基本方法 102
一、雜交前準(zhǔn)備 102
二、雜交 104
三、雜交后處理 105
四、檢測 105
五、對照試驗(yàn) 105
第三節(jié) 熒光原位雜交技術(shù) 105
一、熒光原位雜交探針 106
二、熒光原位雜交技術(shù)類型 106
三、多色熒光原位雜交技術(shù) 107
第四節(jié) 原位PCR技術(shù) 107
一、原位PCR的基本原理 107
二、原位PCR的技術(shù)類型 108
三、原位PCR的技術(shù)特點(diǎn) 109
第五節(jié) 雙重和多重原位雜交技術(shù) 110
一、放射性核素和非放射性標(biāo)記探針的雙重標(biāo)記原位雜交 110
二、非放射性標(biāo)記探針的雙重標(biāo)記原位雜交 111
三、兩種放射性核素標(biāo)記探針的雙重標(biāo)記原位雜交 111
第六節(jié) 原位雜交結(jié)合免疫組織化學(xué)技術(shù) 111
一、原位雜交在先 112
二、免疫組織化學(xué)在先 112
第八章 光學(xué)顯微鏡技術(shù) 114
第一節(jié) 普通光學(xué)顯微鏡 114
一、普通光學(xué)顯微鏡成像原理 114
二、光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu) 115
三、光學(xué)顯微鏡技術(shù)指標(biāo) 117
四、光學(xué)顯微鏡照明技術(shù) 119
五、普通光學(xué)顯微鏡的使用與保養(yǎng) 120
第二節(jié) 倒置顯微鏡 121
第三節(jié) 相差顯微鏡 121
一、相差顯微鏡成像原理 122
二、相差顯微鏡裝置 123
第四節(jié) 熒光顯微鏡 123
一、熒光的產(chǎn)生 123
二、熒光顯微鏡的組成 124
三、熒光素 125
四、熒光顯微鏡主要用途 126
五、熒光顯微鏡使用的主要注意事項(xiàng) 127
第五節(jié) 激光掃描共聚焦顯微鏡 127
一、基本原理 128
二、激光掃描共聚焦顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) 129
三、激光掃描共聚焦顯微鏡的主要特點(diǎn) 130
四、共聚焦顯微鏡圖像模式 130
五、激光掃描共聚焦顯微鏡的主要應(yīng)用 133
六、雙光子（多光子）激光共聚焦顯微鏡 134
第六節(jié) 其他光學(xué)顯微鏡技術(shù) 135
一、暗視野顯微鏡 135
二、近場光學(xué)顯微鏡 136
三、原子力顯微鏡 138
第九章 電子顯微鏡技術(shù) 141
第一節(jié) 透射電子顯微鏡技術(shù) 141
一、透射電鏡術(shù)的基本原理 141
二、超薄切片技術(shù) 143
三、觀察與記錄 149
四、冷凍超薄切片技術(shù) 150
五、冷凍斷裂技術(shù) 151
第二節(jié) 掃描電子顯微鏡技術(shù) 152
一、掃描電鏡術(shù)的基本原理 152
二、掃描電鏡生物樣品制備的基本方法 154
三、特殊掃描電鏡生物樣品制備方法 157
第十章 顯微圖像分析技術(shù) 159
第一節(jié) 顯微圖像分析系統(tǒng)的基本原理 159
第二節(jié) 生物顯微圖像分析系統(tǒng) 160
一、生物顯微圖像分析系統(tǒng)的組成 160
二、生物顯微圖像分析系統(tǒng)軟件組成 162
第三節(jié) 顯微圖像處理 164
一、數(shù)字圖像處理原理 164
二、圖像處理的基本步驟 164
第四節(jié) 生物顯微圖像分析 170
一、二維幾何參數(shù)測量 170
二、體視學(xué)參數(shù)測量 172
三、光度學(xué)參數(shù)測量 175
第五節(jié) 顯微圖像分析質(zhì)量控制 177
一、圖像分析的誤差因素 177
二、圖像分析誤差的計(jì)算 178
三、圖像分析的誤差控制 179
第六節(jié) 國內(nèi)外圖像分析儀 180
一、國產(chǎn)圖像分析儀的情況簡介 180
二、國外圖像分析儀的情況簡介 181
第十一章 流式細(xì)胞術(shù) 183
第一節(jié) 流式細(xì)胞儀原理和組成 183
一、流式細(xì)胞術(shù)分析的基本原理 183
二、流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu) 184
第二節(jié) 熒光素 186
一、熒光 186
二、熒光素的特性 186
三、常用的熒光素 188
第三節(jié) 流式細(xì)胞儀樣本制備和標(biāo)記方法 189
一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段 189
二、樣本處理 189
三、熒光染色 190
四、細(xì)胞分選 190
第四節(jié) 流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)處理 190
一、數(shù)據(jù)的顯示 190
二、數(shù)據(jù)的分析 191
第五節(jié) 流式細(xì)胞儀的應(yīng)用 191
一、細(xì)胞周期檢測 191
二、細(xì)胞凋亡檢測 192
三、細(xì)胞增殖檢測 192
四、細(xì)胞膜標(biāo)記檢測——淋巴細(xì)胞亞群 192
五、細(xì)胞質(zhì)標(biāo)記檢測——細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測 192
六、流式細(xì)胞儀分選技術(shù) 192
七、染色體分析 194
第十二章 組織芯片技術(shù) 195
第一節(jié) 生物芯片 195
一、生物芯片簡介 195
二、生物芯片的種類 196
第二節(jié) 組織芯片技術(shù) 197
一、組織芯片的制備 197
二、組織芯片結(jié)果分析 199
三、組織芯片的優(yōu)點(diǎn)與問題 200
第十三章 細(xì)胞凋亡檢測技術(shù) 202
第一節(jié) 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測 202
一、普通光學(xué)顯微鏡觀察法 203
二、熒光顯微鏡檢測法 203
三、電子顯微鏡觀察法 204
第二節(jié) 凋亡的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)改變檢測 205
第三節(jié) 凋亡細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)檢測 206
一、PI染色法 206
二、Hoechst-PI染色法 206
三、Annexin法 206
第四節(jié) 細(xì)胞凋亡的TUNEL法檢測 207
一、過氧化物酶標(biāo)記測定法 207
二、熒光素標(biāo)記測定法 207
三、生物素-dUTP/酶標(biāo)親和素測定法 208
第五節(jié) 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白質(zhì)和酶的檢測 208
一、Fas抗原的檢測 208
二、Bcl-2蛋白的檢測 208
三、P53蛋白的檢測 208
四、caspase3活性的檢測 209
五、PARP活性的測定 209
第六節(jié) 細(xì)胞凋亡DNA裂解的檢測 209
一、凋亡細(xì)胞DNA裂解的電泳檢測法 209
二、細(xì)胞凋亡DNA裂解的免疫化學(xué)檢測法 210
三、細(xì)胞凋亡DNA裂解的原位末端標(biāo)記法 210
四、彗星分析技術(shù) 211
主要參考文獻(xiàn) 212