《基因工程實驗指導（第3版）》以基因克隆為主線，實驗內容涉及核酸的提取與檢測，靶基因的獲取，基因定點突變、沉默與敲除，質粒的重組，原核及真核表達系統(tǒng)的構建與表達，蛋白質分析與目標產(chǎn)物分離等。每個實驗板塊由導言、知識導圖以及5～9個不同的實驗組成，系統(tǒng)介紹了實驗的相關基本原理，為同一實驗項目提供了多種可供選擇的實驗方法，強調注意事項，并對實驗相關的內容進行評議。第3版還著重擴充了基因工程領域的新技術和新發(fā)展。 《基因工程實驗指導（第3版）》提供了與教材相結合的教學課件、教學視頻、彩圖、拓展性閱讀材料、實驗儀器、操作要點圖片、實驗結果圖片及實驗報告范本等資源，便于教師教學和學生學習使用。 《基因工程實驗指導（第3版）》適用于高等學校生物技術、生物工程、生物科學等相關專業(yè)本科教學使用，也可供從事基因工程教學、科研、生產(chǎn)的工作人員和研究生參考。
實驗計劃表
導論
第一節(jié) 基因工程的四大要素
第二節(jié) 基因克隆的策略
1 核酸的提取與檢測
1-1 基因組DNA的提取
1-2 總RNA和mRNA的提取
1-3 噬菌體DNA的提取
1-4 質粒DNA的提取
1-5 核酸的檢測
1-6 脈沖場凝膠電泳
1-7 宏基因組文庫的構建
2 靶基因的獲取
2-1 PCR擴增
2-2 目的基因片段的獲取
2-3 探針的標記及檢測
2-4 核酸探針篩選基因文庫
2-5 反轉錄PCR
2-6 RACE方法
2-7 反向PCR
2-8 SiteFinding-PCR
2-9 功能基因的活性篩選
3 基因定點突變、沉默與敲除
3-1 基因定點突變
3-2 基因沉默技術
3-3 酵母基因的敲除
3-4 哺乳動物基因的敲除
3-5 植物基因的敲除
4 質粒的重組
4-1 T-A克隆
4-2 感受態(tài)細胞的制備
4-3 重組質粒的轉化
4-4 陽性克隆的篩選
4-5 DNA序列測定與序列同源性分析
5 原核表達系統(tǒng)的構建與誘導表達
5-1 DNA的酶切反應
5-2 靶DNA片段的分離純化
5-3 DNA片段的連接
5-4 表達質粒的構建
5-5 Soulhern印跡
5-6 靶基因的誘導表達
5-7 SDS-PAGE
6 真核表達系統(tǒng)的構建與表達
6-1 外源基因在酵母中的表達
6-2 外源基因在哺乳動物細胞中的表達
6-3 外源基因在植物細胞中的表達
6-4 qRT-PCR分析
6-5 Nor-thern印跡
6-6 Western印跡
6-7 熒光原位雜交
7 蛋白質的分析與目標產(chǎn)物分離
7-1 免疫熒光與激光共聚焦
7-2 雙向電泳
7-3 酵母雙雜交
7-4 蛋白質濃度的測定
7-5 親和層析
參考文獻
附錄1 名詞縮寫
附錄2 實驗操作及儀器使用注意事項
附錄3 如何撰寫實驗報告
附錄4 常用堿基、氨基酸符號及緩沖液
附錄5 大腸桿菌基因型
附錄6 實驗儀器
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