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精編免疫學實驗指南 讀者對象:免疫學、醫(yī)學基礎研究工作者以及臨床實驗工作者
全書共15章,分別介紹了多克隆抗體和單克隆抗體的制備、純化和鑒定,人和小鼠T細胞、B細胞、NK細胞、樹突細胞、巨噬細胞等及其亞群的分離、鑒定和各種功能分析,T細胞、B細胞克隆和T細胞雜交瘤的構建,細胞因子及其受體和分泌細胞因子細胞的檢測等。
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本實驗指南是《現(xiàn)代免疫學方法》(Current Protocolsin Immunology,CPD的精華版。本指南詳細完整地介紹了CPI中的主要技術和方法。本書的對象是免疫學研究人員和已學過免疫學理論的本科生和研究生,本書對其他相關科研工作者也有很好的參考價值。
盡管掌握了本書的技術有利于讀者用免疫學方法設計和完成實驗,但本書并不能代替免疫學的高級培訓計劃,也不能代替免疫學教科書。此外,為了了解免疫學的術語和概念,讀者應當在管理規(guī)范化的免疫學實驗室中學習,以獲得基本技術和安全方面的培訓。
本實驗指南的框架
本指南以章計。各章中有單元,每個單元介紹一種方法并包括一個以上完整的操作方案(附有材料、操作步驟和參考文獻)。本指南的框架與CPI相同,雖然各章中的單元排列與CPI略有不同,但單元的題目是相同的。
本指南中許多試劑和方法是共用的。為了避免操作方案過度復雜和重復,本指南采用各單元和方案間的相互引用。附錄2和附錄3介紹了一些處理動物和細胞的常用技術。如果讀者需要了解相關技術,可參考CPI或其他方法學書籍。
實驗方案
本指南的各單元中常有多組方案,每個方案又有一系列步驟。各單元中首先列出基本方案,基本方案是總體介紹或應用最廣泛的技術。備選方案用不同的設備或試劑達到同樣的實驗結果,由于所選材料不同,方法也與基本方案有所差異。輔助方案介紹的是執(zhí)行基本方案或備選方案所需要的其他步驟,這些步驟分開描述是因為它們可能被本指南的其他部分引用,或它們的操作過程獨立于基本方案和備選方案。
試劑和溶液
每一個方案所需試劑和溶液都列在步驟的前面,包括共用的儲存溶液、常用的緩沖液和培養(yǎng)基以及各方案需要的特殊溶液。附錄1列出所有溶液的配方。需要特別注意的是,在不同單元中,一些溶液的名稱相同(如溶解緩沖液),但配方不同。因此,必須用相應的配方制備所需的試劑。為避免混淆,在附錄1中,每一個試劑的名稱后面都有附加說明列出使用該配方的單元。但常用溶液和緩沖液(如TE緩沖液)沒有附加說明。
注:在本指南的所有方案和附錄中,均必須用去離子雙蒸水配制各種試劑和溶液。需要無菌操作的方案會特別注明。
設備
在每個方案的材料中,均列有該方案所需的特殊設備和器材。本指南雖未列出各方案所需的全部物品,但列出了實驗室不常用的、特殊規(guī)格的或需要特別準備的設備和器材。實驗室所需的常用設備列于后表,這些設備廣泛應用于本指南。
產(chǎn)品供應商
本指南介紹了化學試劑、生物試劑和設備的產(chǎn)品供應商。某些注明的品牌已證明是質(zhì)量或者是市場上僅有的商品,或者是該方案的作者指定在方案中使用的品牌。后一種情況有助于新手在實驗中應用。有經(jīng)驗的研究者也可以用他們熟悉的晶牌做同樣的實驗。
參考文獻
本指南僅在每個單元的最后列出該單元最基本的參考文獻。如果讀者想了解本指南中各方法的背景和應用,可參考CPI。
目錄
譯者序 前言 第一章 免疫應答導論 1 單元1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗1 基本方案 間接ELISA 法檢測特異性抗體 2 備選方案1 直接競爭ELISA 法檢測可溶性抗原 4 備選方案2 抗體夾心ELISA 法檢測可溶性抗原 5 備選方案3 雙抗體夾心ELISA 法檢測特異性抗體 7 備選方案4 夾心ELISA 法檢測同種型 9 備選方案5 直接細胞ELISA 法檢測細胞表面抗原 9 備選方案6 間接細胞ELISA 法檢測抗細胞表面抗原的特異性抗體 11 輔助方案 十字交叉連續(xù)稀釋分析法(criss-cross serial-dilution analysis) 測定試荊最適濃度 12 單元1.2 多克隆抗血清的制備 14 基本方案 使用弗氏佐劑制備多克隆抗體的免疫接種法 15 備選方案 使用其他佐劑制備多克隆抗體的免疫接種法 四 輔助方案 從血液中制備血清 17 單元1.3 單克隆抗體的制備 18 基本方案1 單克隆抗體制備中的免疫接種 19 基本方案2 細胞融合與雜交瘤分選 20 輔助方案1 雜交瘤培養(yǎng)上清的篩選分析 23 輔助方案2 雜交瘤的建系 23 輔助方案3 有限稀釋克隆法 24 輔助方案4 克隆和擴增用培養(yǎng)基的制備 25 單元1.4 單克隆抗體培養(yǎng)上清與腹水的制備 26 基本方案1 單克隆細胞培養(yǎng)上清的制備 27 備選方案1 單克隆細胞培養(yǎng)上清的大規(guī)模制備 27 備選方案2 雜交瘤或細胞系細胞的大規(guī)模制備 27 基本方案2 吉有單克隆抗體的腹水制備 28 單元1.5 免疫球蛋白G (IgG) 的純化 29 基本方案1 硫酸鍍沉淀和凝膠過濾層析 29 基本方案2 蛋白A 交聯(lián)瓊脂糖凝膠親和層析 31 各選方案1 蛋白G 交聯(lián)瓊脂糖凝膠親和層析 32 備選方案2 抗大鼠k鏈單克隆抗體交聯(lián)瓊脂糖凝膠親和層析 33 單元1.6 免疫球蛋白G (lgG) 片段的水解 34 基本方案1 木瓜蛋白酶水解19G 成Fab 片段摸索性試驗 34 基本方案2 木瓜蛋白酶水解19G 獲取Fab 片段的大量制備 35 基本方案3 胃蛋白酶水解19G 成F (ab')2 片段的摸索性試驗 36 基本方案4 胃蛋白酶水解IgG 獲取F (ab)2 片段的大量制備 37 備選方案 用預先活化的木瓜蛋白酶水解IgG 制備F (ab)2 38 單元1.7 免疫球蛋白M (lgM) 和免疫球蛋白D (IgD)的純化 39 基本方案1 用透析和凝膠過濾層析法純化IgM 39 各選方案1 硫酸鍍沉淀法純化IgM 39 備選方案2 甘露聚糖結合蛋白親和純化IgM 40 備選方案3 IgM 純化試劑盒 41 基本方案2 凝集素親和層析法純化小鼠IgD 41 單元1.8 抗體可變區(qū)(V 區(qū))的克隆、表達和修飾 42 基本方案1 通過使用冗余引物克隆和表達免疫球蛋白可變區(qū) 43 輔助方案 TA 載體的制備 48 基本方案2 用ELlSA 法鑒定轉染細胞分泌的抗體分子 49 基本方案3 轉染細胞分泌抗體分子的鑒定 50 單元1.9 核酸免疫 52 基本方案1 小鼠注射接種DNA 53 基本方案2 小鼠基因槍接種DNA 55 輔助方案1 包裹DNA 的金粉顆粒的制備 56 輔助方案2 制備包裹有DNA 的金粉顆粒的樣品管 57 輔助方案3 基因槍接種中氯氣壓力和顆粒大小的最優(yōu)化 59 第二章 小鼠淋巴細胞功能的體內(nèi)體外分析 61 單元2.1 小鼠單個核細胞的分離 63 基本方案 從脾臟、胸腺和淋巴結制備細胞懸液 63 輔助方案l 去除脾臟細胞懸液中的虹細胞 63 輔助方案2 一步梯度法去除死細胞 64 單元2.2 磁珠法分離T細胞和B 細胞 64 基本方案1 用AUTOMACS 系統(tǒng)進行總T細胞、CD4+ 細胞或CD8 +T細胞的自動分離 64 基本方案2 使用AUTOMACS 系統(tǒng)進行B 細胞的自動分選 65 基本方案3 使用AUTOMACS 系統(tǒng)進行輔助細胞的自動分選 66 備選方案1 用磁性分選柱手工操作分離淋巴細胞 66 基本方案4 用AUTOMACS 系統(tǒng)自動分選CD4+CD2 5+ 抑制性細胞 67 備選方案2 用磁性分選柱手工操作分離CD4+CD2 5+ 抑制性細胞 68 單元2.3 樹突細胞的分離 69 基本方案1 塑料就附和EA 玫瑰花結富集DC 70 輔助方案 膠原酶消化制備脾臟細胞懸液 72 基本方案2 用小鼠骨髓前體細胞培養(yǎng)樹突細胞(DC) 73 單元2.4 從小鼠脾臟分離小鼠夭然殺傷細胞 75 基本方案 75 單元2.5 B細胞功能的檢測 77 基本方案1 抗原特異性的抗體產(chǎn)生 77 基本方案2 Jerne-Nordin PFC 測定法 81 基本方案3 Cunningham-Szenberg PFC 測定法 83 備選方案1 改良Jerne-Nordin PFC 測克法用于型特異性反應 85 備選方案2 改良Jerne-Nordin PFC 測定法用于測定多克隆抗體反應 85 輔助方案1 制備瓊脂糖包被的玻片 85 輔助方案2 制備Cunningham-Szenberg 小室 86 輔助方案3 三硝基苯半抗原(TN的偶聯(lián)SRBC 86 輔助方案4 蛋白質(zhì)A 偶聯(lián)SRBC 87 輔助方案5 制備TNp.卵白蛋白 88 輔助方案6 用Percoll 梯度離心純化靜息B 細胞 88 單元2.6 B 淋巴細胞活化的早期事件四 基本方案1 BCR 誘導的B 細胞內(nèi)鈣變化 90 基本方案2 蛋白質(zhì)酷氨酸磷酸化的分析 91 基本方案3 細胞太小與B 細胞活化分子表達的分析 92 單元2.7 B 細胞功能的增殖檢測方法 93 基本方案 抗19M 與LPS 剌激的B 細胞增殖 93 備選方案1 用8疏基哇琳ω-MG) 剌激B 細胞多克隆活化 94 備選方案2 用蛋白激酶C 激活劑及鈣離子載體剌激B 細胞多克隆活化 95 備選方案3 疏酸葡襄糖與poly (1, C) 剌激B 細胞多克隆活化 95 備選方案4 細胞數(shù)量增加的定量 95 單元2.8 BrdU 檢測T細胞和B 細胞增殖 96 基本方案 96 單元2.9 采用細胞內(nèi)熒光染料CFSE 檢測淋巴細胞的遷移和增殖 97 基本方案 淋巴細胞的CFSE 標記 97 輔助方案 流式細胞儀分析CFSE 標記的細胞 99 單元2.10 細胞毒性T淋巴細胞的誘導及檢測 101 基本方案1 從CTL 前體中誘導細胞毒性 101 基本方案2 鏘釋放法分析CTL 活性 103 輔助方案1 次要組織相容性抗原的小鼠體內(nèi)應答 105 輔助方案2 病毒抗原體內(nèi)免疫小鼠 105 輔助方案3 TNP 修飾靶/剌激細胞 106 輔助方案4 病毒感染靶/剌激細胞 106 備選方案1 多克隆CTL 活性的誘導 106 備選方案2 CTL 再寵向殺傷活性的檢測 107 單元2.11 T淋巴細胞增殖實驗 107 基本方案1 未致敏T淋巴細胞的活化 107 備選方案1 用抗體激活未致敏的T細胞 109 備選方案2 混合淋巴細胞增殖實驗 110 輔助方案1 從抗原呈遞細胞或剌激細胞懸液中剔除T淋巴細胞 110 輔助方案2 輔助/剌激細胞的滅活 111 基本方案2 致敏T細胞的活化 112 基本方案3 CD4+CD25+T細胞的活化和抑制功能的檢測 113 備選方案3 CD4+CD2 5+T細胞抑制功能的兩步法檢測z 短期活化和擴增CD4 +CD25+T細胞并分析其抑制功能 114 單元2.12 T細胞克隆的建立 115 基本方案1 產(chǎn)生和維持同種反應性Th 和CTL 克隆 115 基本方案2 用可溶性蛋白抗原誘導Th 克隆 116 輔助方案1 制備刀豆蛋白A 活化的上清(Con A 上清) 118 輔助方案2 制備混合淋巴細胞培養(yǎng)上清(MLC 上清) 118 輔助方案3 制備PMA 激活的EL.4 淋巴瘤細胞上清(EL-4 上清) 119 輔助方案4 用顯微操作的方法克隆 119 單元2.13 制備小鼠T細胞雜交瘤 120 基本方案 細胞融合和T細胞雜交瘤的選擇 120 輔助方案1 篩選表達CD3-TCR 原始雜交瘤 123 輔助方案2 篩選抗原特異性的雜交瘤 124 單元2.14 檢測凋亡和其他形式的細胞死亡 125 基本方案1 用活細胞或熒光染料定量細胞活性 125 基本方案2 DNA 裂解片段的定量 126 備選方案 計數(shù)放射性標記的DNA 定量細胞中DNA 片段 127 輔助方案1 用125 1 UdR 和51Cr 放射性標記細胞核 127 輔助方案2 用H TdR放射性標記細胞核 128 第三章 細胞活化的生物化學 129 單元3.1 淋巴細胞活化過程中肌醇磷脂周轉的分析 130 基本方案1 通過道威克斯(OOWEX) 離子交換層析分析肌醇磷酸 130 備選方案 通過HPLC 方法分析肌醇磷酸 131 基本方案2 通過薄層層析方法分析肌醇磷脂 132 單元3.2 抗磷酸化酷氨酸的印跡檢測 133 基本方案 抗磷酸化酶氨酸印跡檢測的準備及分析 133 備選方案 使用125 1 標記蛋白A 進行檢測 135 單元3.3 免疫復合物方法檢測酶氨酸蛋白激酶 135 基本方案 酶氨酸蛋白激酶的免疫沉淀和自身磷酸化檢測 136 各選方案1 蛋白激酶對外源底物的磷酸化檢測 138 備選方案2 蛋白激酶對外源底物的磷酸化檢測 138 單元3.4 識別特異性酶氨酸磷酸化多膚抗體的制備 139 基本方案1 多克隆抗磷酸膚抗體的制備 139 基本方案2 制備抗磷酸膚的單克隆抗體 141 輔助方案1 膚的合成 144 輔助方案2 膚段偶聯(lián)到Affi.Gel10 親和性基質(zhì) 144 輔助方案3 磷酸酷氨酸偶聯(lián)到Affi-Gel10 親和基質(zhì) 145 單元3.5 T細胞中絲裂原活化的蛋白激酶(MAPK) 活性分析 146 基本方案1 免疫復合物蛋白激酶測定" 146 基本方案2 固相蛋白激酶法檢測JNK 活性 147 基本方案3 SDS-PAGE 后原位檢測JNK 蛋白激酶活性激酶測定 149 基本方案4 利用磷酸化位點特異性抗體檢測MAPK 的活化 150 輔助方案 制備GST-MAPK 底物融合蛋白 151 單元3.6 脂役的分離和應用 153 基本方案 通過藤糖梯度浮選法制備去市劑抗性的膜并通過免疫印跡對蛋白質(zhì)進行分析 153 備選方案 用離心法制備去污劑抗性的膜 156 輔助方案1 脈沖追蹤方法分析去灣劑抗性的膜蛋白 157 輔助方案2 通過放射性標記檢測去污劑抗性的膜蛋白的全部組分 157 輔助方案3 定量高效薄層色譜法CHP-TLCl進行DRM 脂質(zhì)分析 158 輔助方案4 DEAE 葡聚糖凝臟的制備 161 輔助方案5 C18 反相色譜柱的制備 162 輔助方案6 用甲基R 環(huán)式糊精去除膽固醇來破壞脂纜 163 輔助方案7 甲基#環(huán)式糊精(MBCDl處理去除膽固酶的動力學測定 163 輔助方案8 使用MBCD-膽固障復合物進行細胞膽固醇去除 164 第四章 免疲熒光和細胞分離 166 單元4.1 細胞和l 備和試劑 166 基本方案1 單細胞表面抗原的免疫熒光標記 166 基本方案2 固定和滲透單細胞的細胞內(nèi)抗原的免疫熒光標記 167 輔助方案1 用異硫氨酸熒光黃FITCl 偶聯(lián)抗體 169 輔助方案2 長臂生物素偶聯(lián)抗體 170 備選方案1 未固定細胞胞內(nèi)抗原的免疫熒光檢測 170 備選方案2 用7 氨基放線菌素標記死細胞 171 單元4.2 流式細胞儀分析技術BD 公司出品的流式細胞儀 172 基本方案 FITC 偶聯(lián)抗體的單色分析 173 輔助方案1 用校準微球和FACSComp 軟件進行儀器檢測 175 輔助方案2 單色分析區(qū)分活細胞和死細胞 176 各選方案1 FITC 和PE 偶聯(lián)抗體的雙色分析 177 輔助方案3 雙色分析區(qū)分活細胞和死細胞 177 備選方案2 三色分析 178 備選方案3 四色分析 178 第五章 細胞因子及其受體 181 單元5.1 IL-2 和IL-4 的檢測 183 基本方案 采用CTLL-2 細胞檢測小鼠IL-2 和IL-4 183 備選方案1 采用CTLL-2 細胞檢測人IL-2 186 備選方案2 采用CT.4S 細胞檢測小鼠IL-4 186 備選方案3 采用CT.h4 S 細胞檢測人IL-4 187 輔助方案1 自細胞介素或T細胞生長因子(TCGF) 單位的計算 187 輔助方案2 小鼠CTLL-2 細胞的維持 188 輔助方案3 小鼠CT.4S 細胞的維持 189 輔助方案4 小鼠CT.h4 S 細胞的維持 189 單元5.2 IL-10 的檢測 190 基本方案 190 單元5.3 江山的檢測 191 基本方案 人和小鼠IL-12 p75異二聚體的ELlSA 檢測方法 192 備選方案 人和小鼠IL-12亞基的ELlSA 檢測 193 單元5.4 IL-13 的檢測 193 基本方案 193 單元5.5 IL-15 的檢測 194 基本方案 194 單元5.6 IL-18 的檢測 196 基本方案 196 單元5.7 y干擾素的檢測 197 基本方案 197 單元5.8 流式細胞儀檢測細胞內(nèi)因子 199 基本方案 細胞內(nèi)因子的熒光標記 199 輔助方案1 PMA 和lonomyC1n激活T細胞 200 輔助方案2 抗原活化T細胞 201 輔助方案3 固定和凍存PBMC 202 輔助方案4 PBMC 的細胞表面標記 202 輔助方案5 用熒光標記的抗細胞因子抗體標記活化細胞內(nèi)的細胞因子 203 單元5.9 流式細胞儀檢測細胞因子受體 204 基本方案 用抗受體單克隆抗體檢測人和小鼠的細胞因子受體 204 備選方案1 用標記的細胞因子檢測細胞因于受體 206 備選方案2 多參數(shù)分析檢測淋巴細胞亞群細胞困于受體的表達 207 輔助方案1 單克隆抗體和細胞因子的滴定 208 輔助方案2 評價檢測試劑 209 單元5.10 用流式細胞儀檢測細胞因子的分泌和分離分泌細胞因子的細胞 210 基本方案 細胞因子分施實驗 210 備選方案1 PBMC 分描細胞困于的快速檢測 212 備選方案2 全血細胞分泌細胞因子的快速檢測 213 單元5.11 ELISPOT方法檢測分泌細胞困子的細胞 214 基本方案 214 單元5.12 a、R 和Y干擾素誘導的抗病毒活性的檢測 218 基本方案 小鼠干擾素誘導的抗病毒活性的檢測 218 輔助方案1 病毒培養(yǎng)體系的建立 220 輔助方案2 抗體中和實驗 220 備選方案 人干擾素誘導的抗病毒活性的檢測 221 單元5.13 趨化因子超家族的生物學反應 221 基本方案1 微型趨化實驗檢測趨化因子對粒細胞的趨化 221 備選方案1 微型趨化實驗檢測趨化因子對單核細胞的趨化 226 備選方案2 微型趨化實驗檢測趨化因子對淋巴細胞的趨化 227 輔助方案 細胞外基質(zhì)蛋白包被聚碳酸醋膜 228 基本方案2 趨化因子誘導的淋巴細胞內(nèi)游離鈣離子的檢測 228 第六章 天然免疫 231 單元6.1 小鼠巨噬細胞的分離 232 基本方案1 小鼠腹腔巨噬細胞的分離 232 基本方案2 小鼠骨髓巨噬細胞的分離和培養(yǎng) 233 單元6.2 小鼠巨噬細胞的表型檢測 234 基本方案 宜標法檢測小鼠巨噬細胞的表型 235 備選方案 問標法檢測小鼠巨噬細胞的表型" 236 單元6.3 人單核/巨噬細胞的表型檢測 237 基本方案 237 單元6.4 小鼠巨噬細胞的活化 239 基本方案 小鼠巨噬細胞的活化 239 輔助方案 炎性小鼠巨噬細胞的活化 240 單元6.5 巨噬細胞一氧化氮的檢測 241 基本方案 241 單元6.6 巨噬細胞吞噬功能和殺傷功能的檢測 242 基本方案1 巨噬細胞吞噬功能的檢測 243 輔助方案 利用FITC 區(qū)分胞外黠附和胞內(nèi)吞噬的細菌 244 基本方案2 巨噬細胞殺傷功能的檢測 244 輔助方案 單核細胞增多性利斯特氏菌的制備 245 單元6.7 巨噬細胞抗腫瘤活性的檢測 246 基本方案 釋放法檢測巨噬細胞對腫瘤細胞的殺傷作用 246 輔助方案 標記腫瘤靶細胞 249 單元6.8 受體介導的秸附作用和吞噬作用的檢測 251 基本方案 受體介導的吞噬作用 251 輔助方案 介導的雅附作用 253 單元6.9 干擾素介導的抗腫瘤作用 254 基本方案 254 單元6.10 人NKT細胞的分離和擴增 255 基本方案1 NK T細胞的鑒定 255 基本方案2 免疫磁珠法分離NKT細胞及后續(xù)擴增 256 備選方案1 NK T細胞的流式分選及擴增 258 備選方案2 NK T細胞的克隆 258 輔助方案 NKT細胞的二次剌激和克隆 259 第七章 抗原加工處理和呈遞 261 單元7.1 抗原呈遞細胞的選擇和制備 261 基本方案 通過利斯特氏菌剌激制備腹腔巨噬細胞 262 備選方案1 連續(xù)注射利斯特民菌和脈蛋白陳后制備腹腔巨噬細胞 263 輔助方案1 小鼠腹腔注射用利斯特民菌的制備 263 備選方案2 ConA 剌激的腹腔巨噬細胞的制備 264 備選方案3 骨髓來源的巨噬細胞的制備 264 輔助方案2 制備L929 條件培養(yǎng)基 265 備選方案4 制備LPS 剌激的B 細胞 266 單元7.2 外源性抗原向T細胞的呈遞 266 基本方案 一種抗原加工處理和呈遞的檢測體系 267 備選方案1 用固定后的貼壁型抗原呈遞細胞檢測加工處理過的抗原膚 268 備選方案2 用固定后的非貼壁型抗原呈遞細胞檢測加工處理過的抗原膚 269 備選方案3 蛋白抗原致敏的細胞固定后檢測抗原加工和處理 269 第八章 人類免疫學研究 271 單元8.1 外周血和臍帶血中分離單個核細胞 271 基本方案 Ficoll- Hypaque 梯度離心法分離單個核細胞 272 輔助方案 貼壁法去除單個核細胞中的單核細胞和巨噬細胞 272 單元8.2 T細胞亞群的分離純化 273 基本方案 間接淘洗法分離T細胞亞群 273 備選方案 抗體依賴補體介導的細胞毒作用分離T細胞亞群 274 輔助方案1 應用神經(jīng)氨酸酶處理的綿羊紅細胞玫瑰花環(huán)形成法分離T細胞 275 輔助方案2 應用AET處理的綿羊紅細胞玫瑰花環(huán)形成法分離T細胞 276 單元8.3 免疫磁珠法純化T細胞 276 基本方案 276 單元8.4 免疫磁珠法分離B 細胞亞群 278 基本方案 278 單元8.5 單核細胞/巨噬細胞的分離 280 基本方案1 貼壁法分離單核細胞 280 基本方案2 根據(jù)大小沉降作用分離單核細胞 280 基本方案3 對流離心洗淘法分離單核細胞 281 單元8.6 人自然殺傷細胞的分離 283 基本方案 從PBMC 分離人NK 細胞 284 輔助方案 陰性選擇分離NK 細胞的單克隆抗體的滴寇 285 單元8.7 流式細胞儀檢測全血的人淋巴細胞 286 基本方案 286 單元8.8 淋巴細胞增殖實驗 288 基本方案 絲裂原誘導的外周血單個核細胞增殖實驗 288 備選方案1 單向混合淋巴細胞反應 290 各選方案2 抗原誘導的T細胞增殖實驗 292 輔助方案 摻入和細胞收集 292 單元8.9 B細胞分泌抗體的檢測 293 基本方案 293 單元8.10 ELISA 檢測抗體的含量 294 基本方案 294 單元8.11 ELISPOT檢測抗體的含量 295 基本方案 ELISPOT檢測分泌抗體的細胞 296 備選方案 用ELlSPOT檢測儀檢測分泌抗體的細胞 298 單元8.12 抗體的體內(nèi)誘導和檢測 299 基本方案1 蛋白質(zhì)或多糖抗原體內(nèi)法誘導抗體的產(chǎn)生 299 基本方案2 ELlSA 法檢測體內(nèi)抗體的產(chǎn)生 300 輔助方案 肺炎球菌多糖與蛋白質(zhì)的偶聯(lián) 301 單元8.13 T細胞殺傷功能的檢測.302 基本方案1 抗CD3 誘導的T細胞殺傷實驗 302 基本方案2 抗原誘導的特異性T細胞殺傷功能的檢測 303 單元8.14 NK/LAK 細胞殺傷活性的檢測 303 基本方案 51Cr 釋放法檢測NK/LAK 細胞殺傷活性 304 輔助方案 腫瘤靶細胞的制備和標記 306 單元8.15 人T細胞的克隆和擴增 307 基本方案l 抗原特異性T細胞的誘導 307 基本方案2 Th1 或Th2細胞的誘導 308 輔助方案1 T細胞的克隆 310 輔助方案2 克隆后T細胞的擴增 311 輔助方案3 T細胞克隆的凍存 312 單元8.16 制備EBV 轉化的B 細胞 313 基本方案 313 單元8.17 分離人腸秸膜單個核細胞 314 基本方案 分離人腸藉膜單個核細胞 314 輔助方案 用尼龍毛過濾器去除死細胞 316 單元8.18 人樹突細胞分離和培養(yǎng) 317 基本方案1 從外周單個核細胞中分離人樹突細胞 317 備選方案 免疫磁珠法分離樹突細胞 319 基本方案2 用單核細胞誘導人樹突細胞 319 單元8.19 分離和鑒定人自然殺傷細胞亞群 321 基本方案 從PBMC 中分離人NK 細胞 321 輔助方案 人NK 細胞亞群的表型和功能分析 322 第九章 HIV 的檢測與分析 326 單元9.1 外周血中HIV 的分離和定量檢測 327 基本方案1 外周血中HIV 的培養(yǎng)以及通過TCID 定量來測定其滴度 327 基本方案2 感染同種異型T淋巴母細胞z 原代分離PBMC 中的HIV 329 輔助方案 評估HIV 對CD4+ 靶細胞的致細胞病變效應, HIV 介導的細胞死亡 329 單元9.2 感染CD4+ 原代細胞系及HIV 的誘導 330 基本方案1 用HIV 體外急性感染CD4+ 原代細胞及細胞系 330 基本方案2 建立HIV 慢性感染細胞系 332 基本方案3 慢性感染細胞系中HIV 的誘導" 333 單元9.3 在單核細胞和巨噬細胞中培養(yǎng)HIV 334 基本方案 單核細胞來源的巨噬細胞培養(yǎng)和HIV 感染 334 備選方案 用HIV 懸液感染單核細胞來源的巨噬細胞 336 輔助方案1 擴增實驗室保存的親巨噬細胞的HIV-l 病毒株 336 輔助方案2 擴增原代分離的親巨噬細胞的HIV-l 病毒株 337 單元9.4 HIV 蛋白的檢測 338 基本方案1 免疫印跡法檢測HIV 蛋白 339 基本方案2 免疫熒光法檢測HIV 蛋白 340 備選方案 流式細胞儀分析細胞內(nèi)HIV 蛋白 342 基本方案3 HIV 反轉錄酶活性檢測 343 單元9.5 用PCR 檢測HIV 的DNA 及RNA 345 基本方案1 用PCR 擴增及檢測HIV 的DNA 345 基本方案2 用RT-PCR 檢測HIV 的RNA 349 單元9.6 體外評價各種制劑的抗HIV 活性 352 基本方案1 保護靶T細胞免受HIV 致細胞病變效應 352 基本方案2 表達CD4的HeLa 細胞合胞體斑形成抑制試驗 353 基本方案3 ELISA 檢測抗病毒劑對PBMC 中HIV p24 抗原產(chǎn)生的抑制作用 355 輔助方案 50%抑制濃度的計算 357 單元9.7 基于癥苗病毒報道基因細胞融合檢測法定量功能性測定HIV 包膜糖蛋白與受體的相互作用 358 基本方案用質(zhì)粒表達包膜蛋白及受體進行融合檢測 359 備選方案1 用重組病毒對各種成分的融合試驗 361 備選方案2 活化的可溶性CD4融合檢測 362 輔助方案1 比色法測寇融合-依賴的報道基因活性 362 輔助方案2 原位染色測定報道基因活性 363 第十章 自身免疫性及炎癥性疾病動物模型" 365 單元10.1 小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE) 366 基本方案 應用PLP 和MBP 蛋白或多膚主動誘導EAE 366 備選方案 MBP 或PLP 特異性淋巴細胞被動轉移性誘導EAE 369 輔助方案1 PLP 蛋白的純化 369 輔助方案2 MBP 蛋白的純化 370 單元10.2 大鼠佐劑性關節(jié)炎 371 基本方案 佐劑性關節(jié)炎的誘導 371 輔助方案 分枝抨菌懸液的制備 373 單元10.3 膠原誘導性關節(jié)炎 373 基本方案 誘導小鼠膠原性關節(jié)炎 374 輔助方案1 II型膠原(CII)的純化 375 輔助方案2 肢原(11) 1 鏈的純化 376 輔助方案3 膠原(11) 1 鏈內(nèi)漠化氟裂解片段的純化 377 輔助方案4 小鼠關節(jié)炎的評定 380 輔助方案5 檢測CIA 小鼠T細胞對CII 的增殖應答 381 單元10.4 小鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎 382 基本方案1 實驗性自身免疫性甲狀腺炎的誘導和評定 382 輔助方案 小鼠甲狀腺球蛋白的制備 384 基本方案2 誘導EAT耐受 385 單元10.5 小鼠實驗性自身免疫性重癥肌無力 386 基本方案 EAMG 的誘導和評定 386 輔助方案1 AChR 的抽提與親和純化 388 輔助方案2 神經(jīng)毒素3 瓊脂糖的制備 390 輔助方案3 應用肌電圖評定EAMG 391 輔助方案4 通過檢測抗AChR 抗體來評定EAMG 391 輔助方案5 小鼠肌肉AChR 的制備 393 單元10.6 NOD小鼠2-種膜島素依賴性糖尿病模型 394 基本方案1 元特殊病原菌(SPF) 級NOD 小鼠的飼養(yǎng) 394 基本方案2 腕島素依賴性糖尿病(IDDM) 的診斷 396 備選方案 半定量膜島炎以作為進展為IDDM 的亞臨床表現(xiàn) 396 輔助方案 膜腺中膜島細胞的分離 398 單元10.7 通過耗竭調(diào)節(jié)性T細胞誘導自身免疫性疾病 400 基本方案 通過胸腺切除術誘導年輕的成年太鼠糖尿病 400 備選方案 應用胸腺切除術誘導3 周齡大鼠糖尿病 402 單元10.8 通過耗竭調(diào)節(jié)性T細胞誘導免疫缺陷小鼠炎癥性腸道疾病 402 基本方案 轉輸T細胞誘導SCID小鼠IBD 402 輔助方案 監(jiān)測IBD 進展 404 單元10.9 氣道高反應性動物模型 406 基本方案 應用OVA 全身致敏及氣道激發(fā)誘導氣道超敏反應 406 輔助方案1 使用全身體積氣壓描記器非侵人性檢測氣道反應性 407 備選方案 OVA 致敏氣道誘導氣道超敏反應 408 輔助方案2 體外檢測氣道對電場剌激的反應性 409 輔助方案3 T細胞功能和氣道炎癥的評寇 410 單元10.10 誘導小鼠TNBS 結腸炎 411 基本方案小鼠TNBS 結局炎的誘導和評定 411 輔助方案1 分離小鼠腸系膜淋巴結細胞 412 輔助方案2 分離結腸炎小鼠的秸膜固有層細胞 413 單元10.11 系統(tǒng)性紅斑狼瘡動物模型 414 基本方案1 ELISA 檢測小鼠血清中抗染色質(zhì)抗體 415 基本方案2 單鏈和雙鏈DNA 抗體的檢測 416 基本方案3 ELISA 檢測類風濕因子 417 基本方案4 ELISA 檢測同種異型特異性抗體時標準曲線的制作 417 備選方案 ELISPOT檢測抗染色質(zhì)抗體形成細胞 420 輔助方案1 低滲裂解雞紅細胞核制備雞染色質(zhì) 421 輔助方案2 出DNA 的制備 421 輔助方案3 基于PCR 技術的fas腫突變體和fasL突變體的基因分型 422 第十一章 傳染性疾病動物模型 425 單元11.1 問什曼原蟲感染的小鼠模型 425 基本方案 皮膚利什曼原蟲病小鼠模型 425 輔助方案1 使用花生凝集素制備后發(fā)育期前鞭毛體 427 輔助方案2 從足墊組織中純化無鞭毛體 428 輔助方案3 前鞭毛體和無鞭毛體的冷藏和復蘇 429 輔助方案4 血瓊脂培養(yǎng)板的制備 430 單元11.2 弓形蟲感染動物模型 430 基本方案1 誘導小鼠急性弓形蟲T.gondii 感染 431 基本方案2 小鼠慢性弓形蟲腦炎模型 431 基本方案3 感染T.gondii 的重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠 432 基本方案4 溫度敏感的TS-4 T.gondii 菌株的感染模型 432 輔助方案1 對T.gondii 感染進展和免疫應答的評估 433 輔助方案2 ME49 T.gondii 包囊種子庫的維持和保存 435 輔助方案3 用人類包庭成纖維細胞保存T.gondii速殖于 436 輔助方案4 小鼠體內(nèi)保存T.gondii 速殖子 436 輔助方案5 T.gondii 裂解物抗原的準備 437 單元11.3 巨細胞病毒感染小鼠模型的建立 438 基本方案巨細胞病毒感染小鼠模型 438 輔助方案1 巨細胞病毒的準備 439 輔助方案2 唾液腺病毒的制備 440 輔助方案3 用空斑形成細胞試驗測定巨細胞病毒滴皮 441 輔助方案4 原代小鼠胚胎成纖維細胞的制備 441 單元11.4 單核細胞增生性利斯特氏菌感染動物模型 442 基本方案 用單核細胞增生性1阿斯特氏菌株感染鼠 443 輔助方案1 小鼠感染利斯特氏菌后的特異性和固有免疫反應評估 444 輔助方案2 1阿斯特民菌特異性T細胞的制備 445 單元1 1.5 淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒感染動物模型 447 基本方案1 全身性感染LCMV 小鼠模型 447 基本方案2 LCMV 病毒持續(xù)感染小鼠模型 449 基本方案3 T細胞對LCMV 免疫反應的測定 450 基本方案4 LCMV 疫苗效果的體內(nèi)檢測 451 輔助方案1 LCMV 病毒儲存液的制備 452 輔助方案2 噬菌斑試驗測定LCMV 病毒滴度 453 輔助方案3 ELISA 檢測LCMV 抗體 454 單元11.6 流感病毒 454 基本方案1 流感病毒鼻腔內(nèi)感染麻醉的小鼠 455 備選方案 流感病毒鼻腔內(nèi)感染未麻醉小鼠 455 輔助方案1 流感病毒在雞胚中擴增 455 輔助方案2 雞胚尿囊液內(nèi)流感病毒滴度的測定 457 輔助方案3 MDCK 細胞的長期培養(yǎng) 458 輔助方案4 培養(yǎng)組織流感病毒感染劑量。CID50) 的測寇 458 輔助方案5 小鼠50%致死劑量(MLD,,)和小鼠50%感染劑量(MID ) 459 輔助方案6 檢測流感病毒滴度的小鼠肺臟制備 461 輔助方案7 流感病毒儲存液中血凝單位的測定 462 輔助方案8 小鼠血清的血凝抑制試驗(HAI) 463 輔助方案9 流感病毒儲存液(原液)的系列稀釋 464 基本方案2 從脾臟前體細胞獲得流感病毒特異性的細胞毒T淋巴細胞(CTL) 464 基本方案3 收集含抗流感病毒CTL 的肺臟細胞 465 輔助方案10 流感病毒中和試驗 466 第十二章 蛋白質(zhì)分離和分析 468 單元12.1 免疫親和層析 468 基本方案 可溶性或膜結舍抗原的分離 468 備選方案1 抗原低pH 洗脫 471 備選方案2 用辛燒基[t-D-葡糖背洗脫抗原 471 單元12.2 免疫沉淀 472 基本方案1 用非變性去垢劑裂解細胞制成的懸液進行免疫沉淀 472 備選方案1 用含非變性去垢劑洛液裂解的貼壁細胞進行免疫沉淀 476 備選方案2 用含變性去垢劑裂解液裂解的細胞進行免疫沉淀 476 備選方案3 用元去垢劑裂解液裂解的細胞進行免疫沉淀 476 備選方案4 用抗體-Sepharose 進行免疫沉淀 477 輔助方案 抗體Sepharose 的制備 479 備選方案5 用與ANTI-lg 結合的放射性標記的抗原進行免疫沉淀 480 基本方案2 再次捕獲免疫沉淀 480 單元12.3 單向蛋白質(zhì)凝膠電泳 483 基本方案 483 單元12.4 凝膠蛋白質(zhì)染色 486 基本方案1 考馬斯亮藍染色 486 基本方案2 銀染 486 基本方案3 SYPRO Orange 或SYPRO Red 熒光染色 487 基本方案4 SYPRO Ruby 熒光染色 488 備選方案1 聚丙烯眈膠凝膠上磷蛋白的特異性熒光染色 489 輔助方案 磷酸酶氨酸殘基的特異性檢測 490 備選方案2 同一塊凝膠上的糖基化蛋白和非糖基化蛋白的差異性熒光染色 491 單元12.5 免疫印跡和免疫檢測 492 基本方案1 液體容器中的蛋白質(zhì)印跡 492 備選方案1 半干膠系統(tǒng)蛋白質(zhì)印跡 494 輔助方案1 轉移蛋白的可逆染色 495 基本方案2 采用工抗檢測的免疫探針法 495 備選方案2 親和素生物素化二抗的免疫探針法 496 基本方案3 生色底物顯色 497 備選方案3 生包底物顯色 498 輔助方案2 膜蛋白解離與再生 499 第十三章 肽 500 單元13.1 合成膚用以制備識別完整蛋白質(zhì)的抗體 500 基本方案1 通過計算機輔助方法選擇合適的抗原膚序列 500 備選方案1 通過人工篩查挑選合適的膚序列 501 基本方案2 設計一條膚鏈與載體蛋白相偶聯(lián) 502 備選方案2 設計合成一條多價抗原膚 503 基本方案3 使用雙功能團試劑將合成膚偶聯(lián)至載體蛋白 504 備選方案3 使用雙功能回試劑將舍成膚偶聯(lián)至載體蛋白 505 輔助方案 計算膚連接到載體蛋白上的摩爾率 505 單元13.2 抗多膚血清的制備 507 基本方案1 在兔體內(nèi)制備抗多膚血清的免疫接種流程 507 基本方案2 用間接ELlSA 法檢測抗多膚抗體滴度 507 基本方案3 使用酸性、堿性或離液洗脫液的親和層析柱 508 輔助方案1 預先榕脹的NHS 或CNBr 活化樹脂的膚免疫親和層析柱的制備 509 輔助方案2 疏基化椅脂填充的膚親和層析柱的制備 511 單元13.3 采用合成膚組合庫鑒定B 細胞和T細胞的表位 512 基本方案1 采用PS-SCL 篩選抗體抑制劑 512 基本方案2 篩查PS-SCL 鑒定CD4+ 或CD8+ T細胞的配體 514 輔助方案 優(yōu)化用于篩查的抗原和抗體濃度 515 第十四章 分子生物學 518 單元14.1 293T細胞包裝和擴增反轉錄病毒 519 基本方案1 磷酸鈣/DNA 沉淀瞬時轉染Phoen皿反轉錄包裝細胞 519 備選方案1 水痕性口炎病毒G 蛋白的假型反轉錄病毒 521 輔助方案1 水殖性口炎病毒G 蛋白假型反轉錄病毒的濃縮和低溫儲存 521 輔助方案2 Phoenix 細胞的培養(yǎng) 522 基本方案2 感染貼壁細胞 523 備選方案2 貼壁細胞快速(spin) 感染見基本方案 523 備選方案3 懸浮細胞的快速(spin) 感染 524 單元14.2 免疫球蛋白融合蛋白的構建 524 基本方案1 免疫球蛋白融合蛋白的梅建 524 基本方案2 免疫球蛋白融合基因分析 526 單元14.3 單鏈抗體的噬菌體展示技術 529 基本方案1 全套單鏈抗體噬菌體載體的構建 532 基本方案2 scFv 展示噬菌體在抗原包被板上的親和篩選 537 備選方案 鏈霉親和素包被的磁珠富集篩選生物素化抗原結舍的scFv 展示噬菌體 540 基本方案3 ELISA 鑒定抗原結合的scFv 展示噬菌體 541 輔助方案1 輔助噬菌體凍存液的配制 543 輔助方案2 指紋圖譜和PCR 檢測克隆的正確性和多樣性 544 輔助方案3 蛋白質(zhì)的生物素化(NHS-SS-生物素) 545 輔助方案4 利用生物素-蛋白連接酶使蛋白生物素化 545 單元14.4 整體培養(yǎng)中同型轉換重排的PCR 檢測 546 基本方案1 通過轉換接頭的直接PCR 546 輔助方案 通過PCR 和隨機引物標記法制備5'部探針 550 基本方案2 消化環(huán)化PCR 550 單元14.5 PCR 檢測細胞因子mRNA 的表達 553 基本方案 寇量IL-2 mRNA 表達水平 553 單元14.6 PCR 檢測人T細胞受體基因的表達 556 基本方案PCR 檢測人T細胞受體基因的表達 556 備選方案PCR 定量檢測TCR 可變序列轉錄產(chǎn)物 559 輔助方案1 重排V-D-J 區(qū)測序 560 輔助方案2 cDNA 合成 562 單元14.7 PCR 檢測小鼠T細胞受體表達 563 基本方案1 PCR 分析小鼠TCR 基因表達 563 基本方案2 PCR 檢測小鼠TCR 可變區(qū)的頻率 567 基本方案3 對小鼠可變區(qū)轉錄物進行PCR 定量 567 基本方案4 序列分析V (D) J 區(qū)的接頭多樣性 570 輔助方案 DNA 舍成用于小鼠TCR 基因表達的PCR 分析 571 單元14.8 TCR 庫的抗原譜/免疫掃描技術分析 572 基本方案1 人和小鼠TCR 受體庫多樣性的免疫掃描技術分析 574 備選方案利用["町dCTP 進行免疫掃描分析 580 基本方案2 鏈接區(qū)引物進行高特異的分光光度分析 581 基本方案3 TCR 基因擴增產(chǎn)物的快速高通量測序 582 單元14.9 多探針核糖核酸酶保護試驗同時測定mRNA 表達.586 基本方案 多探針核糖核酸酶保護試驗 586 輔助方案1 構建一個核糖探針模板 590 輔助方案2 凝膠電泳和結果的可視化 592 單元14.10 端粒長度和端粒酶活性的分析 593 基本方案1 Sou雜交檢測傳統(tǒng)凝膠電泳中末端端粒DNA 限制性片段(TRF)的端粒長度 593 備選方案1 尼龍膜上的Southem 雜交 594 輔助方案1 端;蚱渌丫酆丝嗨崮┒藰擞 595 基本方案2 用脈沖電場凝膠電泳法測量端粒 595 基本方案3 熒光原位雜交 597 基本方案4 QFISH 599 輔助方案2 從分裂的淋巴細胞中制備分裂中期染色體 601 基本方案5 端粒酶活性的測定 601 備選方案2 非放射性的TRAP 分析方法1熒光染料(SYBR 1)標記 604 備選方案3 非放射性的TRAP 分析方法2熒光染料(TAMRA-TS) 標記 604 第十五章 免疫分子與受體工程學 606 單元15.1 用MHC-Ig 二聚體檢測抗原特異性T細胞 607 基本方案 構建MHC I-Ig 二聚體 607 輔助方案1 測定MHC-jg 融合蛋白濃度 610 輔助方案2 轉染細胞大規(guī)模培養(yǎng)及上清的濃縮 611 輔助方案3 用5-4-握基-3-硝基酷乙酷-瓊脂糖凝膠層析法純化MHC-Ig二聚體 612 輔助方案4 制備5-棋-4-費基-3-硝基酣乙酷-瓊脂糖凝膠 613 輔助方案5 通過被動交換法為MHC-Ig嵌合蛋白負載多膚 614 輔助方案6 堿洗脫法負載多膚 614 輔助方案7 溫和酸性條件下負載多膚 615 輔助方案8 流式細胞分析抗原特異性T細胞 615 單元15.2 用MHC 膚四聚體顯現(xiàn)抗原特異性T細胞 616 基本方案1 制備帶BirA 底物標簽的MHCI 類分子亞單位體 619 基本方案2 MHC 1 類分子膚復合物的重新折疊 622 輔助方案1 用ELISA 測寇MHC 623 輔助方案2 用分子大小排阻層析法進行超濾和純化以濃縮折疊蛋白 624 基本方案3 用酶進行生物素化、純化及生物素化效率的分析 625 基本方案4 用鏈親和素使生物素化的單體形成多聚體 628 基本方案5 用標記的MHCI 類分子四聚體通過流式細胞分析含特異性T細胞受體的細胞 629 附錄1 試劑與溶液 631 附錄2 實驗用小鼠、大鼠和倉鼠 701 附錄2A 常用小鼠和大鼠品系 701 附錄2B 飼養(yǎng) 704 附錄2C 處理和捕捉 706 基本方案1 小鼠的處理和捕捉 707 基本方案2 大鼠的處理和捕捉 707 基本方案3 倉鼠的處理和捕捉 708 備選方案 嚙齒類動物捕捉器 708 附錄2D 麻醉 709 基本方案1 小鼠、大鼠和倉鼠的注射麻醉 710 基本方案2 用甲氧氟燒吸入法麻醉小鼠、大鼠和倉鼠 711 附錄2E 腹腔注射 712 基本方案1 小鼠、大鼠和倉鼠的肌肉注射 712 基本方案2 小鼠、大鼠和倉鼠的皮內(nèi)注射 713 基本方案3 小鼠、大鼠和倉鼠的皮下注射 713 基本方案4 小鼠的靜脈注射 714 基本方案5 小鼠、大鼠和倉鼠的腹膜內(nèi)注射 715 基本方案6 小鼠足墊注射 715 基本方案7 小鼠胸腺內(nèi)注射 715 附錄2F 血液收集 716 基本方案1 小鼠和大鼠的眼眶或眼血管叢取血 717 基本方案2 小鼠和太鼠的尾靜脈微量采血管取血 717 備選方案 從小鼠和大鼠的尾靜脈以離心管取血 718 基本方案3 小鼠腋窩叢取血 718 附錄2G 安樂死 719 基本方案1 二氧化碳窒息 719 基本方案2 過量戊巴比妥注射 719 備選方案1 麻醉下放血 720 備選方案2 小鼠頸椎脫臼 720 附錄2H 淋巴器官和胸腺的摘除 720 基本方案1 小鼠淋巴器官的摘除 720 基本方案2 脾切除術 722 備選方案 脾半切除術 723 基本方案3 新生鼠胸腺摘除 724 基本方案4 成年鼠的胸腺摘除術 725 輔助方案 胸腺吸人套管的制備 727 附錄3 免疫學常用細胞實驗技術 729 附錄3A 細胞生長的檢測 729 基本方案1 血細胞計數(shù)板計數(shù)細胞 729 基本方案2 庫爾特粒度儀計數(shù)細胞 729 附錄3B 細胞凍存 730 基本方案1 細胞株或雜交瘤的凍存 730 基本方案2 細胞株或雜交瘤細胞的復蘇 730 附錄3C 臺盼藍拒染試驗檢測細胞活力 731 基本方案 731 附錄3D 瑞民一吉姆薩和非特異性醋酶染色 732 基本方案1 瑞氏吉姆薩染色通常用于淋巴細胞形態(tài)的研究 732 基本方案2 非特異性醋酶染色 733 附錄3E H TdR的摻入 733 基本方案 733 附錄3F 判斷并處理細胞培養(yǎng)中的支原體污染 734 基本方案1 檢測可能存在的支原體污染 734 基本方案2 用BM-cyc1in 處理污染的細胞 735 備選方案 用環(huán)丙沙星處理支原體污染的細胞 736 附錄3G 人外周血單個核細胞的分離 736 基本方案 靜脈穿刺采集外周血 736 備選方案 淋巴細胞去除法取血 737 附錄4 試劑和設備的供應商 738 參考文獻 785 索引 797
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