目錄
實驗一毒理學(xué)實驗的基礎(chǔ)知識與綜合技能1
一、案例與問題1
二、毒理學(xué)實驗概述1
三、毒理學(xué)實驗規(guī)范與職業(yè)道德3
四、毒理學(xué)實驗設(shè)計要求4
五、實驗動物管理與實驗者自身防護6
六、動物實驗流程與基本操作技術(shù)7
七、思考題13
實驗二毒物代謝動力學(xué)研究與實驗技術(shù)14
一、教學(xué)目的與意義14
二、背景資料14
三、案例與問題14
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)15
課題名稱：對硫磷與甲基對硫磷代謝動力學(xué)實驗15
五、毒物代謝動力學(xué)試驗主要方法與技術(shù)21
【題目】甲基對硫磷的代謝轉(zhuǎn)化試驗21
六、思考題24
實驗三一般毒性研究與實驗技術(shù)25
一、教學(xué)目的與意義25
二、背景資料25
三、案例與問題26
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)26
課題名稱：氯胺嘧草醚的一般毒性試驗與評價26
五、一般毒性試驗主要方法與技術(shù)28
（一）急性經(jīng)口毒性試驗28
（二）急性吸入毒性試驗33
（三）急性經(jīng)皮毒性試驗34
（四）亞慢性毒性實驗35
（五）慢性毒性試驗38
六、思考題40
實驗四遺傳毒性研究與實驗技術(shù)41
一、教學(xué)目的與意義41
二、背景資料41
三、案例與問題42
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)42
課題名稱：苯并（a）芘的遺傳毒性測試與評價42
五、遺傳毒性試驗主要方法與技術(shù)43
（一）鼠傷寒沙門菌營養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變試驗43
（二）哺乳動物細胞基因突變試驗47
實驗1小鼠淋巴瘤細胞L5178YTK+基因突變試驗48
實驗2中國倉鼠肺V79（CHO）/hGPRT基因突變試驗49
（三）小鼠骨髓細胞微核試驗51
（四）染色體畸變分析52
實驗1體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗53
實驗2動物骨髓細胞染色體畸變試驗55
（五）單細胞凝膠電泳試驗56
六、思考題58
實驗五表觀遺傳毒性研究與實驗技術(shù)59
一、教學(xué)目的與意義59
二、背景資料59
三、案例與問題59
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)60
課題名稱：某環(huán)境有害因素與表觀遺傳修飾改變的關(guān)聯(lián)性研究60
五、表觀遺傳毒性實驗主要方法與技術(shù)62
（一）DNA甲基化檢測的主要方法和技術(shù)62
實驗1亞硫酸氫鹽修飾結(jié)合甲基化特異性PCR62
實驗2亞硫酸氫鹽修飾后測序64
（二）組蛋白修飾檢測的主要方法和技術(shù)65
實驗1組蛋白特定位點修飾水平的檢測——蛋白質(zhì)印跡法65
實驗2組蛋白特定位點在基因富集水平的檢測——染色質(zhì)免疫共沉淀法67
（三）microRNA檢測的主要方法和技術(shù)69
實驗1實時熒光定量PCR法檢測microRNA表達69
實驗2雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證microRNA靶基因71
六、思考題72
實驗六致癌作用研究與實驗技術(shù)73
一、教學(xué)目的與意義73
二、背景資料73
三、案例與問題74
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)74
課題名稱：NNK致癌作用測試及評價74
五、致癌作用實驗主要方法與技術(shù)76
（一）細胞體外惡性轉(zhuǎn)化實驗76
（二）哺乳動物長期致癌實驗81
（三）其他致癌實驗84
六、思考題85
實驗七生殖發(fā)育毒性研究與實驗技術(shù)86
一、教學(xué)目的與意義86
二、背景資料86
三、案例與問題86
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)87
課題名稱：鎘及其化合物的生殖發(fā)育毒性評價87
五、生殖發(fā)育毒性試驗主要方法與技術(shù)89
（一）生育力和早期胚體發(fā)育毒性試驗89
（二）致畸試驗90
（三）圍生期發(fā)育毒性試驗93
（四）一代（或二代）生殖毒性試驗94
（五）精子質(zhì)量分析96
（六）性激素水平的測定97
（七）外源化學(xué)物對大鼠睪丸間質(zhì)細胞的損傷模型98
（八）外源化學(xué)物對大鼠卵巢顆粒細胞的損傷模型100
六、思考題101
實驗八納米材料損害作用研究與實驗技術(shù)102
一、教學(xué)目的與意義102
二、背景資料102
三、案例與問題103
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)103
課題名稱：納米二氧化鈦的毒性作用評價103
五、納米材料損害作用試驗主要方法與技術(shù)105
（一）納米材料的前處理方法105
（二）納米材料表面特征觀察107
（三）納米材料對細胞活力的影響108
（四）納米材料急性經(jīng)口毒性實驗109
六、思考題111
實驗九電離輻射損害作用研究與實驗技術(shù)112
一、教學(xué)目的與意義112
二、背景資料112
三、案例與問題112
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)112
課題名稱：電離輻射生物損傷效應(yīng)特征及常用檢測方法112
五、電離輻射損害作用試驗主要方法與技術(shù)113
（一）核素溶液配制113
（二）鈾礦塵對細胞增殖的影響115
（三）鈾礦塵致支氣管上皮細胞損傷的活性氧檢測116
（四）電離輻射致DNA雙鏈損傷的γ-H2AX含量變化檢測117
六、思考題119
實驗十呼吸系統(tǒng)毒性研究與實驗技術(shù)120
一、教學(xué)目的與意義120
二、背景資料120
三、案例與問題121
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)121
課題名稱：PM2. 5急性肺毒性作用研究121
五、呼吸系統(tǒng)毒性試驗主要方法與技術(shù)123
（一）潮氣量和氣流流速測定123
（二）胸內(nèi)壓測定124
（三）呼吸道液分泌功能測定——小鼠酚紅排泄法124
（四）支氣管肺泡灌洗液（BALF）分析125
（五）大鼠氣道黏液中肺表面活性物質(zhì)的測定128
（六）離體試驗法128
實驗1離體肺灌流與分析128
實驗2離體氣管片試驗法129
實驗3乳鼠肺細胞原代培養(yǎng)與上皮細胞純化130
實驗4體外培養(yǎng)的肺巨噬細胞中乳酸脫氫酶（LDH）
活性測定131
六、思考題133
實驗十一肝臟毒性研究與實驗技術(shù)134
一、教學(xué)目的與意義134
二、背景資料134
三、案例與問題134
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)135
課題名稱：評價未知化學(xué)物肝損害及探討其毒性作用機制135
五、肝臟毒性試驗主要方法與技術(shù)136
（一）肝損傷動物模型建立136
實驗1急性化學(xué)性肝損傷動物模型136
實驗2肝纖維化動物模型137
（二）肝臟亞細胞組分的制備138
實驗1肝臟微粒體的制備138
實驗2肝臟線粒體的制備139
（三）肝損害體內(nèi)評價技術(shù)139
實驗1肝微粒體細胞色素P450含量的測定139
實驗2丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性測定140
實驗3天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性測定141
實驗4堿性磷酸酶（ALP）活性測定142
實驗5肝臟排泄功能測定143
實驗6肝臟分泌功能測定144
實驗7肝纖維化測定145
（四）肝損害體外評價方法146
實驗1離體肝臟灌流與分析146
實驗2肝細胞、Kupffer 和Ito細胞的分離與培養(yǎng)148
實驗3肝細胞膜流動性檢測150
實驗4肝細胞線粒體膜通透性檢測151
實驗5肝細胞線粒體膜電位檢測152
實驗6肝細胞線粒體呼吸功能檢測153
實驗7肝細胞線粒體能量代謝功能檢測155
六、思考題156
實驗十二腎臟毒性研究與實驗技術(shù)157
一、教學(xué)目的與意義157
二、背景資料157
三、案例與問題158
（一）案例一158
（二）案例二158
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)158
課題名稱一：中藥關(guān)木通引起大鼠腎臟毒性作用探討158
課題名稱二：綜合評價百草枯急性中毒引起的腎臟毒性作用159
五、腎臟毒性試驗主要方法與技術(shù)160
（一）尿液的一般生化指標(biāo)測定160
（二）腎臟血流動力學(xué)和血流量分析161
（三）腎小球濾過率測定161
（四）血肌酐﹑尿素和尿酸濃度測定162
（五）腎濃縮稀釋試驗163
（六）形態(tài)學(xué)和酶組織化學(xué)檢查163
（七）腎臟微灌注及微穿刺技術(shù)164
（八）腎皮質(zhì)薄片培養(yǎng)及腎膜囊泡的分離與應(yīng)用165
六、思考題166
實驗十三神經(jīng)系統(tǒng)毒性研究與實驗技術(shù)167
一、教學(xué)目的與意義167
二、背景資料167
三、案例與問題168
（一）案例一168
（二）案例二168
（三）案例三168
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)168
課題名稱一：評價MPTP對小鼠大腦多巴胺能神經(jīng)元的損傷168
課題名稱二：綜合評價有機磷化合物的遲發(fā)性神經(jīng)毒性169
課題名稱三：正己烷神經(jīng)毒性及機制探討170
五、神經(jīng)系統(tǒng)毒性試驗主要方法與技術(shù)171
（一）實驗動物神經(jīng)行為學(xué)171
實驗1自主活動度檢測（曠場試驗）171
實驗2 Morris水迷宮實驗172
實驗3轉(zhuǎn)棒試驗（滾軸試驗）173
實驗4后肢撐力實驗173
實驗5抓力測定174
實驗6感覺神經(jīng)功能174
方法1. 鼠尾痛覺測定174
方法2. 智能熱板儀法175
（二）神經(jīng)病理形態(tài)學(xué)方法175
實驗1神經(jīng)細胞尼氏體染色175
實驗2免疫組化檢測MPTP誘導(dǎo)的小鼠大腦多巴胺能神經(jīng)元損傷（SP法）176
（三）周圍神經(jīng)傳導(dǎo)速度測定178
（四）HPLC熒光法測定動物大腦興奮性神經(jīng)遞質(zhì)178
（五）大鼠海馬組織突觸膜谷氨酸受體的放射配體結(jié)合分析179
（六）神經(jīng)元體外試驗體系181
（七）有機磷農(nóng)藥的遲發(fā)性神經(jīng)毒性評價181
六、思考題182
實驗十四免疫毒性研究與實驗技術(shù)183
一、教學(xué)目的與意義183
二、背景資料183
三、案例與問題184
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)184
課題名稱：阿特拉津的免疫毒性檢測與評價184
五、免疫毒性試驗主要方法與技術(shù)185
（一）體液免疫檢測185
實驗1溶血空斑實驗185
實驗2血清中免疫球蛋白IgG和IgM的測定187
（二）特異性細胞免疫反應(yīng)187
實驗1淋巴細胞增殖實驗187
實驗2遲發(fā)型過敏反應(yīng)（delayed-type hypersensi-tivity，DTH）188
實驗3細胞毒性T淋巴細胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）活性的測定189
（三）非特異性細胞免疫反應(yīng)189
實驗1NK細胞活性檢測（乳酸脫氫酶釋放法）189
實驗2巨噬細胞吞噬能力檢測190
六、思考題191
實驗十五血液毒性研究與實驗技術(shù)192
一、教學(xué)目的與意義192
二、背景資料192
三、案例與問題193
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)194
五、血液毒性試驗主要方法與技術(shù)195
（一）紅細胞毒性檢測195
實驗1網(wǎng)織紅細胞計數(shù)195
實驗2紅細胞滲透脆性試驗196
實驗3高鐵血紅蛋白測定196
實驗4變性珠蛋白小體測定197
實驗5碳氧血紅蛋白測定198
實驗6鐵動力學(xué)試驗199
（二）白細胞和血小板毒性檢測199
實驗1白細胞墨汁吞噬試驗199
實驗2血小板黏附試驗200
（三）凝血功能毒性檢測201
實驗1血漿凝血酶原時間測定201
實驗2活化部分凝血活酶時間測定202
（四）骨髓毒性檢測203
實驗1骨髓細胞學(xué)檢查203
實驗2外源性脾結(jié)節(jié)測定205
實驗3體內(nèi)擴散盒瓊脂培養(yǎng)技術(shù)206
實驗4骨髓微循環(huán)觀察206
六、思考題207
實驗十六皮膚毒性研究與實驗技術(shù)208
一、教學(xué)目的與意義208
二、背景資料208
三、案例與問題209
四、課題設(shè)計與實驗指導(dǎo)210
課題名稱：海娜粉皮膚毒理學(xué)安全性評價210
五、皮膚毒性試驗主要方法與技術(shù)212
（一）皮膚刺激性/腐蝕性試驗212
（二）急性眼刺激性/腐蝕性試驗214
（三）皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗217
（四）小鼠耳腫脹試驗（mouse ear swelling test，MEST）219
（五）皮膚光毒性試驗220
（六）皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗221
（七）人體斑貼試驗222
（八）人體皮膚試用試驗224
六、思考題225
實驗十七毒理學(xué)替代法的應(yīng)用與實驗技術(shù)226
一、教學(xué)目的與意義226
二、背景資料226
三、案例與問題227
（一）案例227
（二）問題228
四、課題設(shè)計與試驗指導(dǎo)228
課題名稱：用毒理學(xué)替代試驗對化妝品原料——果酸的一般毒性和特殊毒性進行篩選和檢測228
五、毒理學(xué)替代試驗主要方法與技術(shù)228
（一）急性經(jīng)口毒性替代試驗——急性毒性分級法228
（二）皮膚腐蝕性替代試驗——人重組皮膚模型試驗232
（三）發(fā)育毒性替代試驗——微團培養(yǎng)試驗（the micromass test，MM Test）234
六、思考題239
實驗十八毒理學(xué)與公共衛(wèi)生安全和管理實例分析240
一、教學(xué)目的與意義240
二、背景資料240
三、案例分析242
四、思考題247
參考文獻248