作為宿主范圍決定因子的細胞凋亡影響了桿狀病毒殺蟲劑在生物防治中的應用,本書針對桿狀病毒誘導細胞凋亡內容進行介紹,共分為6章。第1章介紹桿狀病毒誘導的細胞凋亡及RNAi技術,對桿狀病毒誘導細胞凋亡在實踐應用中的重要意義和以往研究背景進行介紹;第2章介紹Splt-iap4和Splt-p49基因轉錄和翻譯研究;第3章介紹應用RNAi技術研究Splt-iap4和Splt-p49基因功能,結果表明Splt-P49具有抑制細胞凋亡的作用,而Splt-IAP4對細胞有聚集作用;第4章介紹Splt-iap4和Splt-p49 瞬時表達及抗細胞凋亡活性研究,Splt-P49能夠抑制vAcAnh感染誘導的Sf9細胞的凋亡并能恢復病毒的復制,但Splt-IAP4不能;第5章介紹桿狀病毒與抗凋亡基因的進化關系研究;第6章介紹SpltNPV感染誘導Se301細胞凋亡的檢測與分析,SpltNPV的感染可導致Se301細胞出現(xiàn)明顯的早期凋亡癥狀,但不能進行到凋亡的最后階段,說明早期細胞凋亡仍然是限制病毒完成復制周期的重要因素。
第1章 桿狀病毒誘導的細胞凋亡及RNAi技術
1.1 核多角體病毒
1.2 桿狀病毒感染與宿主的關系
1.3 桿狀病毒宿主專一性
1.4 細胞凋亡概念及其形態(tài)學特征
1.5 細胞凋亡與細胞壞死的區(qū)別
1.6 細胞凋亡的分子機制
1.7 桿狀病毒感染引起的細胞凋亡研究
1.8 抗凋亡基因
1.8.1 p35基因
1.8.2 p49基因
1.8.3 iap基因
1.9 RNAi技術
1.9.1 RNAi的發(fā)現(xiàn)與發(fā)展
1.9.2 RNAi作用機制
1.9.3 RNAi機制中的主要成員
1.9.4 用RNAi方法研究特定基因功能的技術路線
第2章 Splt-iap4、Splt-p49的基因轉錄和翻譯研究
2.1 材料與方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 結果與分析
2.2.1 Splt-iap4轉錄時相
2.2.2 Splt-p49轉錄時相
2.2.3 Splt-iap4表達時相
2.2.4 Splt-p49表達時相
2.3 討論
2.4 小結
第3章 應用RNAi技術研究Splt-iap4和Splt-p49基因功能
3.1 材料與方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 結果
3.2.1 Splt-iap4和Splt-p49基因的PCR擴增結果
3.2.2 對照cat基因的PCR擴增結果
3.2.3 重組質粒p28i-p49和p28i-iap4的酶切鑒定
3.2.4 重組質粒p28i-cat的酶切鑒定
3.2.5 Splt-P49和Splt-IAP4凋亡功能檢測
3.2.6 Splt-IAP4蛋白沒有協(xié)同抗凋亡作用
3.2.7 Splt-IAP4對細胞有聚集作用
3.2.8 Splt-iap4 dsRNA處理對產生感染性病毒粒子的影響
3.2.9 RNAi對SpltNPV感染SpLi-221細胞的影響
3.3 討論
3.4 小結
第4章 Splt-iap4和Splt-p49瞬時表達及抗細胞凋亡活性研究
4.1 材料與方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 結果與分析
4.2.1 瞬時表達載體的構建
4.2.2 瞬時表達蛋白檢測
4.2.3 Splt-IAP4和Splt-P49抗凋亡活性檢測
4.3 討論
4.4 小結
第5章 桿狀病毒與抗凋亡基因的進化關系研究
5.1 材料與方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 結果與分析
5.2.1 43株桿狀病毒全基因組特征
5.2.2 43株桿狀病毒全基因組中的抗凋亡基因
5.2.3 iap的序列比對和進化分析
5.3 討論
5.4 小結
第6章 SpltNPV感染誘導Se301細胞凋亡的檢測與分析
6.1 材料與方法
6.1.1 材料
6.1.2 方法
6.2 結果與分析
6.2.1 光學顯微鏡觀察SpltNPV感染Se301細胞的形態(tài)學變化
6.2.2 電子顯微鏡觀察SpltNPV感染Se301細胞的形態(tài)學變化
6.2.3 DAPI染色
6.2.4 臺盼藍(trypan blue)染色
6.2.5 DNA ladder
6.2.6 滴度測定
6.2.7 dot blotting
6.2.8 RT-PCR
6.2.9 SDS-PAGE和western blotting分析
6.3 討論
6.4 小結
總結
參考文獻
縮略詞