《生物化學與分子生物學實驗教程》為適應高等醫(yī)學院校的實驗教學改革和發(fā)展需要而編寫。分為生化與分子生物學實驗（包括基礎性實驗、綜合性實驗和創(chuàng)新設計實驗）與生化與分子生物學基本技術兩篇。在實驗項目的設置上，除了蛋白質、核酸的分離純化分析、酶學、糖類、脂類分析等基礎實驗外，大部分的綜合性實驗和創(chuàng)新設計實驗則是來源于教師們的科研項目。在實驗的基礎理論方面，增加了近年來常用的RNA干擾等較新的技術。每一篇有英文小結，附錄中有常用儀器、技術等中英文詞匯對照表�！渡锘瘜W與分子生物學實驗教程》內容較新穎，體系較完整，不同層次實驗的培養(yǎng)目標有所側重，便于基礎醫(yī)學等專業(yè)不同層次學生選擇。
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目錄
前言
第一篇 生物化學與分子生物學實驗
第一章 基礎性實驗 3
實驗1 蛋白質的呈色反應、沉淀現(xiàn)象觀察及等電點的測定 3
實驗2 蛋白質含量的測定 6
實驗3 丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用 10
實驗4 紅細胞葡糖-6-磷酸脫氫酶活性測定 12
實驗5 血清丙氨酸轉氨酶活性測定（紫外速率法及改良穆氏法） 17
實驗6 糖化血紅蛋白的測定 21
實驗7 血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳 23
實驗8 血紅蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 25
實驗9 血糖測定 27
實驗10 胰島素、腎上腺素對家兔血糖濃度的影響 31
實驗11 血清總膽固醇測定 33
實驗12 質粒DNA的提取、酶切與鑒定 37
實驗13 酵母RNA的成分鑒定 40
實驗14 PCR擴增G6PD基因外顯子11-12片段 41
實驗15 尿中酮體的檢出 43
實驗16 血清尿素氮測定（二乙酰一肟法） 44
第二章 綜合性實驗 47
實驗17 真核細胞基因組DNA的提取、定量和純度測定 47
實驗18 小鼠基因組DNA的Southern blotting分析 49
實驗19 小鼠腦組織總RNA提取與RT-PCR獲取真核基因片段 54
實驗20 pMD19-G6PD重組子的藍白斑篩選及酶切鑒定 59
實驗21 pThioHis (A)-G6PD重組表達質粒的鑒定 63
實驗22 G6PD重組酶的誘導表達、分離及比活性測定 66
實驗23 ATP、ADP和NADPH對G6PD酶促反應的影響 70
實驗24 小鼠PKC基因的克隆、鑒定及其6His融合蛋白的大腸桿菌表達和純化 76
實驗25 SDS-PAGE測定蛋白質的表觀分子量 83
實驗26 小鼠血清IgG的Western blotting分析 87
實驗27 血紅蛋白的等電聚焦分離及其等電點測定 94
實驗28 醋酸纖維薄膜電泳技術分離乳酸脫氫酶同工酶 97
實驗29 血清蛋白的鹽析及清蛋白/球蛋白的測定 100
尖驗30 血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳分離及定量測定 103
實驗31 酶的特異性及溫度、pH、激活劑、抑制劑對酶活性的影響 106
實驗32 小鼠肝細胞核的分離、純化與鑒定 109
實驗33 動脈硬化指數(shù)的計算 112
實驗34 糖的硅膠G薄層層析分析鑒定 114
第三章 創(chuàng)新設計實驗 117
實驗35 乙醛脫氫酶2基因型的檢測 117
實驗36 針刺“足三里”穴位對家兔血糖濃度的雙向調節(jié)作用 120
實驗37 小鼠PKCε相互作用蛋白質的捕獲、鑒定 122
實驗38 小鼠肝總蛋白質的雙向電泳分離 125
實驗39 人血漿同型半胱氨酸的測定（ELISA方法） 129
實驗40 自毀容貌綜合征的生化與分子生物學分析 131
實驗41 G6PD缺陷的診斷及其發(fā)病的分子基礎 132
實驗42 HL-60細胞中DAPK基因甲基狀態(tài)的檢測 133
實驗43 胰島素促進HepG2細胞對葡萄糖吸收的檢測 135
第二篇 生物化學與分子生物學技術
第四章 分光光度技術 141
第一節(jié) 分光光度技術的基本原理 141
第二節(jié) 分光光度計的組成與結構 143
第二節(jié) 分光光度技術的應用 145
第五章 電泳技術 148
第一節(jié) 概述 148
第二節(jié) 幾種常用電泳簡介 149
第六章 層析技術 152
第七章 離心技術 156
第一節(jié) 離心技術的基本原理 156
第二節(jié) 離心機的類型 157
第三節(jié) 制備型離心的分離方法 158
第四節(jié) 離心操作的注意事項 159
第八章 聚合酶鏈反應與印跡技術 161
第一節(jié) PCR技術 161
第二節(jié) 印跡技術 165
第九章 基因工程技術 170
第一節(jié) 基因工程技術的相關概念 170
第二節(jié) 基因工程技術的基本原理及技術路線 171
第三節(jié) 基因工程技術在醫(yī)學領域的應用 175
第十章 熒光標記技術 177
第一節(jié) 熒光現(xiàn)象 177
第二節(jié) 熒光探針 179
第三節(jié) 熒光標記樣品的檢測 180
第十一章 RNA干擾技術 187
第一節(jié) RNA干擾的作用機制 187
第二節(jié) RNA干擾技術的應用 189
第十二章 生物芯片技術 191
第一節(jié) 基因芯片 191
第二節(jié) 蛋白質芯片 193
第十三章 雙向凝膠電泳 196
第十四章 蛋白質三維結構建模 200
第一節(jié) 蛋白質結構相關知識 200
第二節(jié) 蛋白質結構預測實例 201
參考文獻 205
附錄一 生物化學與分子生物學常用數(shù)據(jù)庫和軟件 208
附錄二 生物化學與分子生物學常用試劑和培養(yǎng)基的配制方法 210
附錄三 生物化學及分子生物學實驗常用縮略語 213
附錄四 生物化學與分子生物學實驗常用詞中英文對照 216
獲得的，是否能夠識別其他種屬來源的同一種蛋白質并與其結合。為了解這一問題，首先應該向提供抗體的廠家了解情況，其次是查文獻了解是否有其他人成功應用的范例，再就是檢索序列資料數(shù)據(jù)庫，比較不同種屬來源的相同種類蛋白質的相關多肽片段的氨基酸序列的相似程度。如果對某一抗體的不同種屬的適用性情況無法了解，那就別無選擇，須要先少量購買一些抗體，做一個預實驗來確定該抗體的適用性。
選擇抗體還需要注意的一點是，一般的抗目標蛋白抗體的種屬來源應該與待分析蛋白質樣品的種屬來源不同。否則在應用二抗檢測進行顯示時，極易受蛋白質樣品中存在的IgG干擾，影響結果的解釋，尤其對微量蛋白質的檢測極為不利，應該注意盡量避免這種情況的出現(xiàn)。
第二抗體的選擇主要是針對第一抗體的種屬來源和檢測顯示手段這兩方面進行的，一般不需要再考慮其他方面。
2.過夜溫浴的注意事項
如果需要過夜、長時間抗體溫浴，需要防止雜菌大量繁殖。一般可以于4=C進行溫浴，如果沒有4℃溫浴條件，可以在溫浴液中加入防腐劑。對于待用辣根過氧化物酶標記二抗進行檢測時，可以在溫浴液中加防腐劑硫柳汞至終濃度為0.05％。
【思考題】
1.一般科研工作實踐中，轉印膜都需要進行染色和記錄結果，并且與最終的Westernblotting結果進行對照。你認為這有必要嗎？為什么？
2.蛋白質印跡分析能否用于直接檢測未知蛋白質？為什么？
3.如果某一蛋白質的存在量足以用染色法直接顯示，是否仍然會有必要應用操作較為煩瑣的蛋白質印跡實驗？為什么？
附：增強的化學發(fā)光顯示方法
用增強的化學發(fā)光顯示方法（enhanced chemiluminescence，ECL）進行酶標免疫檢測比常用的呈色顯示方法的檢測靈敏度高100～1000倍甚至以上，現(xiàn)在國內外實驗室已經(jīng)將增強的化學發(fā)光顯示方法作為蛋白質印跡分析的常規(guī)檢測方法使用。此處介紹的增強的化學發(fā)光顯示方法的所用試劑可以在市場上買到白行配制，與市場上可以購買到的成品增強的化學發(fā)光顯示試劑相比，靈敏度上稍遜一籌，但是費用極為低廉，適合于一般實驗室采用。但是須要注意，使用增強的化學發(fā)光顯示方法的先決條件之一是需要有暗室可用。
……
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前言/序言
醫(yī)學實驗教學是醫(yī)學教育的重要組成部分，是培養(yǎng)學生實踐能力、科學思維和創(chuàng)新精神的主要途徑，因此，提高醫(yī)學實驗教學質量將有助于提升整體醫(yī)學教育水平。生物化學與分子生物學實驗技術是當代醫(yī)學研究的重要手段和方法，也是醫(yī)學相關專業(yè)和各層次學生的必修實驗課。為了適應高等醫(yī)學院校實驗教學改革和發(fā)展的需要，構建多層次、多模塊的醫(yī)學生物化學與分子生物學實驗教學體系，我們編寫了本教材。
本教材分為兩篇，第一篇為生物化學與分子生物學實驗，第二篇為生物化學與分子生物學技術。根據(jù)實驗內容和要求，結合教學邏輯和規(guī)律，為滿足不同層次學生的需求，將實驗分為基礎性實驗、綜合性實驗和創(chuàng)新設計實驗3個模塊。基礎性實驗有助于鞏固學生基本理論知識和培養(yǎng)學生基本實驗操作技能；綜合性實驗多來源于教師的科研項目，應用了多種生物化學與分子生物學實驗技術，經(jīng)過多輪教學的實際檢驗，有利于培養(yǎng)學生的綜合分析能力；創(chuàng)新設計實驗從臨床病例出發(fā)，通過設計實驗方案，探討疾病的生物化學與分子機制，培養(yǎng)學生的科研能力。
本教材注重實驗的科學性與實用性相結合、知識傳授與素質培養(yǎng)相結合、實驗技術與臨床應用相結合。為了便于學生自主學習，還介紹了生物化學與分子生物學常用軟件和網(wǎng)絡資源。此外，為配合雙語教學的開展，附錄中有本教材中使用的儀器、常用試劑、名詞等的中英文對照。
各高等醫(yī)學院校根據(jù)各專業(yè)各層次學生的培養(yǎng)目標和要求，可選擇本教材中不同模塊的實驗項目實施實驗教學。此外，本
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