目錄
前言
第一章 微生物育種學(xué)實驗室的儀器設(shè)備及基本操作 1
第一節(jié) 微生物育種學(xué)實驗室注意事項 1
第二節(jié) 微生物育種學(xué)實驗室的主要儀器設(shè)備 1
第三節(jié) 微生物育種學(xué)實驗中的基本操作 10
第二章 微生物的分離篩選與鑒定 39
實驗1 土壤中四大類微生物的分離與鑒別 39
實驗2 堿性蛋白酶產(chǎn)生菌的分離篩選及活性測定 43
實驗3 脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選 47
實驗4 產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的分離及酶活檢測 50
實驗5 抗生素產(chǎn)生菌的篩選及活性測定 52
實驗6 土壤中纖維素分解菌的分離 57
實驗7 生物降解塑料產(chǎn)生菌的分離 61
實驗8 有機鹵化物降解菌的篩選 63
實驗9 極端環(huán)境中嗜熱菌的分離 67
實驗10 自養(yǎng)型硝酸細(xì)菌的分離 68
實驗11 利用亨蓋特厭氧滾管技術(shù)對雙歧桿菌進(jìn)行活菌計數(shù) 72
實驗12 擔(dān)子菌的分離培養(yǎng) 75
實驗13 噬菌體的分離、純化及其效價的測定 76
實驗14 抗噬菌體蘇氨酸產(chǎn)生菌的選育 80
實驗15 宏基因組文庫構(gòu)建 82
實驗16 細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng) 88
實驗17 利用16S rRNA基因序列分析進(jìn)行微生物分類鑒定 92
第三章 微生物的誘變育種 107
實驗18 細(xì)菌的紫外誘變 107
實驗19 營養(yǎng)缺陷型的篩選和鑒定 110
實驗20 紫外線與硫酸二乙酯復(fù)合誘變產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌 115
實驗21 利用氮離子注入誘變技術(shù)篩選L-精氨酸高產(chǎn)突變株 118
實驗22 耐高濃度自身代謝產(chǎn)物卡那霉素鏈霉菌的高產(chǎn)菌株的選育 120
實驗23 利用AEC抗性突變選育金針菇高賴氨酸含量品種 122
實驗24 高通量選育復(fù)合誘變的谷氨酸高產(chǎn)菌 124
實驗25 由轉(zhuǎn)座子引起的插入突變 126
實驗26 正交法優(yōu)化培養(yǎng)條件 127
實驗27 響應(yīng)面法優(yōu)化米曲霉α-淀粉酶發(fā)酵培養(yǎng)基 130
實驗28 均勻?qū)嶒炘O(shè)計優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基配方 136
第四章 細(xì)胞水平基因重組育種 141
實驗29 大腸桿菌雜交及基因定位實驗 141
實驗30 大腸桿菌λ噬菌體的局限性轉(zhuǎn)導(dǎo) 144
實驗31 酵母單倍體細(xì)胞分離與鑒定 147
實驗32 谷氨酸棒桿菌的原生質(zhì)體融合 150
實驗33 霉菌原生質(zhì)體的融合 153
實驗34 酵母的原生質(zhì)體融合 156
實驗35 應(yīng)用基因組改組技術(shù)選育谷氨酸高產(chǎn)菌 159
第五章 分子育種 163
實驗36 利用電子克隆技術(shù)獲得基因 163
實驗37 擴展青霉脂肪酶基因的克隆與表達(dá) 172
實驗38 酵母乙醇脫氫酶II基因敲除 176
實驗39 Red系統(tǒng)介導(dǎo)的大腸桿菌的基因敲除 179
實驗40 PCR定點突變改造微生物菌種 184
實驗41 基于易錯PCR的分子定向進(jìn)化 188
第六章 菌種保藏 193
實驗42 常用的簡易菌種保藏法 194
實驗43 冷凍真空干燥保藏法 198
實驗44 液氮超低溫保藏法 200
主要參考文獻(xiàn) 203
附錄1 常用培養(yǎng)基的配制 205
附錄2 常用試劑和溶液的配制 214