本書全面系統(tǒng)介紹了微生物學(xué)基本實驗技術(shù)及其在微生物相關(guān)領(lǐng)域的生產(chǎn)實踐與食品衛(wèi)生檢測方面的應(yīng)用。全書包括十五章九十八個實驗,內(nèi)容涵蓋顯微鏡使用技術(shù),微生物染色技術(shù),培養(yǎng)基制備技術(shù),消毒、滅菌與除菌技術(shù),微生物的接種與分離培養(yǎng)技術(shù),微生物的生長與環(huán)境條件,微生物的生理生化試驗,分子微生物學(xué)實驗技術(shù),微生物菌種選育技術(shù),菌種保藏技術(shù),病毒常用實驗技術(shù),常用免疫學(xué)實驗技術(shù),動物實驗技術(shù),生產(chǎn)實踐中常用微生物分離與性能鑒定技術(shù),食品微生物指標檢測技術(shù)等;附錄部分,列出了微生物學(xué)實驗常用染色液、指示劑、試劑、溶液、緩沖液、培養(yǎng)基配制方法,以及微生物學(xué)實驗中一些常用數(shù)據(jù)表。本書在編寫過程中,注重實驗內(nèi)容的系統(tǒng)性、應(yīng)用性與科學(xué)性,可作為從事生物與食品等相關(guān)工作人員的工具書和參考書。
1.數(shù)量多,含有80個微生物學(xué)實驗技術(shù),基本涵蓋了微生物實驗的方方面面;2.內(nèi)容新,介紹了微生物指標新的國標檢測方法與技術(shù)手段;3.講解清楚,步驟詳細,技術(shù)實用,非常方便讀者理解和掌握。
微生物學(xué)實驗技術(shù)是微生物學(xué)的重要組成部分,其方法獨特、實踐性強、應(yīng)用面廣、技術(shù)綜合等,已滲透到現(xiàn)代生命科學(xué)的相關(guān)領(lǐng)域并推動其發(fā)展。加強微生物學(xué)實驗教學(xué),對培養(yǎng)同學(xué)們觀察能力、動手能力,提高辯證思維能力和創(chuàng)新能力具有重要作用,并可為日后從事微生物學(xué)相關(guān)的教學(xué)、科研和生產(chǎn)實踐打下扎實基礎(chǔ)。
本書2008年第1版名稱是《微生物學(xué)實驗技術(shù)》,2014年進行修訂并更名為《新編微生物學(xué)實驗技術(shù)》,2020年列為河南省十四五規(guī)劃教材!缎戮幬⑸飳嶒灱夹g(shù)》是在總結(jié)生物工程、生物制藥、食品質(zhì)量與安全、食品科學(xué)與工程、乳品工程專業(yè)多年實驗教學(xué)經(jīng)驗基礎(chǔ)上,結(jié)合往屆畢業(yè)生就業(yè)去向,參考兄弟院校的實驗教材及相關(guān)資料編寫而成。本書對微生物學(xué)的各類實驗技術(shù)和操作技能進行了較系統(tǒng)的論述,一方面,著重加強同學(xué)們對微生物學(xué)基本實驗技能和動手操作能力的訓(xùn)練;另一方面,著重加深同學(xué)們對微生物學(xué)實驗技術(shù)在生產(chǎn)實踐中應(yīng)用重要性的認識。全書內(nèi)容總體可概括為以下三個方面:
一、基本操作技能訓(xùn)練的實驗:主要包括無菌操作技術(shù)、細菌染色與鏡檢技術(shù)、培養(yǎng)基制備與滅菌技術(shù)、微生物接種與分離純化技術(shù)、菌種鑒定與保藏技術(shù)等。
二、加深理論知識理解的實驗:主要包括各類微生物形態(tài)觀察、生理生化試驗、生長曲線測定、環(huán)境因素對微生物的影響、微生物菌種選育及常用免疫學(xué)技術(shù)等。
三、生產(chǎn)實踐中常用到的實驗:主要包括生產(chǎn)實踐中常用微生物分離與性能鑒定技術(shù),以及動物實驗技術(shù)、食品微生物指標檢測技術(shù)等內(nèi)容。
本次修訂在保留2014年版主要內(nèi)容和特點的基礎(chǔ)上,新增加了18個實驗:培養(yǎng)基的制備2個、現(xiàn)代分子微生物實驗7個、病毒常用實驗技術(shù)3個、常用免疫學(xué)實驗技術(shù)6個;參照最新國標對食品微生物指標檢測技術(shù)一章的5個實驗進行了更新完善,力求使教材內(nèi)容更加全面,更好與社會發(fā)展接軌,更好適應(yīng)新時代高級專業(yè)技術(shù)人才培養(yǎng)的需要。
本書的具體編寫情況為:秦翠麗編寫第一章、第二章、第十三章,牛明福編寫第十一章、第十四章、第十五章,尤曉顏編寫第七章、第八章、第九章、第十章,侯穎編寫第十二章、附錄,宮強編寫第三章,第四章、第五章、第六章。
本書的編寫和出版得到了河南科技大學(xué)教務(wù)處、化學(xué)工業(yè)出版社有限公司、河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院、河南科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院、洛陽師范學(xué)院生命科學(xué)院、洛陽師范學(xué)院食品與藥品學(xué)院、普萊柯生物工程有限公司、華蘭生物工程有限公司等單位的大力支持,對此表示衷心的感謝。
本書在編寫過程中還得到了河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院康懷彬、古紹彬教授,河南科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院汪洋教授,河南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院郝有武博士,洛陽師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院陳萬光教授、食品與藥品學(xué)院賈禮博士,普萊柯生物工程有限公司田克恭研究員,華蘭生物工程有限公司王偉潔助理研究員等的大力幫助和熱心支持,河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院龔明貴、張勇法、李市場、孫曉菲、張紅梅、趙君峰等博士為本書的資料整理和編寫工作付出了很多辛勤勞動,在此向他們一并表示衷心的感謝。
本書編寫人員均為教齡在10年以上的教學(xué)與科研一線骨干教師,他們在長期的微生物學(xué)教學(xué)與研究工作中積累了豐富的實踐經(jīng)驗,本書是他們集體智慧的結(jié)晶,但由于學(xué)識水平所限,教材中的疏漏和不當之處在所難免,敬請讀者批評指正。
編者
2022年12月12日
實驗須知 001
第一章 顯微鏡使用技術(shù) 003
實驗一 普通光學(xué)顯微鏡的使用 003
實驗二 暗視野顯微鏡的使用 009
實驗三 相差顯微鏡的使用 011
實驗四 熒光顯微鏡的使用 012
實驗五 電子顯微鏡的使用 017
第二章 微生物染色技術(shù) 023
實驗一 單染色法 023
實驗二 復(fù)染色法 025
實驗三 特殊染色法 027
實驗四 負染色法 031
實驗五 微生物細胞內(nèi)貯藏物質(zhì)的染色 032
實驗六 霉菌菌絲染色 034
第三章 培養(yǎng)基制備技術(shù) 035
實驗一 細菌常用培養(yǎng)基的配制 036
實驗二 真菌常用培養(yǎng)基的配制 037
實驗三 選擇性培養(yǎng)基的配制 038
實驗四 鑒別性培養(yǎng)基的配制 040
第四章 消毒、滅菌與除菌技術(shù) 043
實驗一 加熱及紫外線消毒與滅菌 043
實驗二 過濾除菌 047
實驗三 化學(xué)藥物消毒與滅菌 049
實驗四 玻璃器皿的洗滌、包扎與滅菌 051
第五章 微生物的接種與分離培養(yǎng)技術(shù) 054
實驗一 微生物的接種 054
實驗二 微生物的分離純化方法 059
實驗三 微生物的培養(yǎng)方法 063
實驗四 微生物的培養(yǎng)特征觀察 067
第六章 微生物的生長與環(huán)境條件 071
實驗一 微生物細胞大小的測量 071
實驗二 微生物數(shù)量的測定血細胞計數(shù)板法 073
實驗三 細菌生長曲線的測定 075
實驗四 酵母菌死活細胞的鑒別 076
實驗五 環(huán)境因素對微生物生長的影響 077
第七章 微生物的生理生化試驗 082
實驗一 細菌的生理生化試驗 082
實驗二 酵母菌的生理生化試驗 088
實驗三 霉菌的生理生化試驗 093
第八章 分子微生物學(xué)實驗技術(shù) 096
實驗一 細菌質(zhì)粒的提取與檢測 097
實驗二 細菌基因組DNA的提取 099
實驗三 細菌DNA中(G C)mol%含量的測定 101
實驗四 利用16S rRNA序列鑒定微生物 104
實驗五 核酸分子雜交技術(shù)檢測微生物 106
實驗六 利用ITS序列鑒定真菌 108
實驗七 微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性的分析 110
第九章 微生物菌種選育技術(shù) 114
實驗一 誘變育種的基本程序及操作要點 114
實驗二 紫外線誘變最適劑量的測定 121
實驗三 高產(chǎn)蛋白酶曲霉的選育 124
實驗四 營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選 126
實驗五 抗噬菌體菌株的選育 128
實驗六 酵母菌細胞原生質(zhì)體融合 130
實驗七 電誘導(dǎo)酵母菌與短梗霉屬間的融合 133
第十章 菌種保藏技術(shù) 136
實驗一 常用簡易保藏法 136
實驗二 冷凍真空干燥保藏法 139
實驗三 液氮超低溫冷凍保藏法 141
實驗四 厭氧性細菌保藏法 143
實驗五 噬菌體保藏法 144
實驗六 食用菌菌種保藏法 145
實驗七 蒸餾水或其他溶液保藏法 148
第十一章 病毒常用實驗技術(shù) 150
實驗一 病毒形態(tài)觀察與大小測定 150
實驗二 病毒包涵體的觀察 151
實驗三 噬菌體的分離與純化 153
實驗四 噬菌體效價的測定 155
實驗五 病毒的雞胚接種 157
實驗六 病毒的細胞分離培養(yǎng)法 160
實驗七 病毒的半數(shù)細胞感染量(CCID50)測定 164
實驗八 病毒蝕斑分析實驗 167
第十二章 常用免疫學(xué)實驗技術(shù) 171
實驗一 抗原的制備 171
實驗二 免疫血清的制備 173
實驗三 凝集反應(yīng) 176
實驗四 沉淀反應(yīng) 178
實驗五 補體結(jié)合反應(yīng) 180
實驗六 血凝試驗與血凝抑制試驗 184
實驗七 免疫酶測定法 186
實驗八 中和試驗 189
實驗九 細菌內(nèi)毒素測定實驗(鱟試劑凝膠法) 191
實驗十 外周血單個核細胞的分離與觀察 195
實驗十一 巨噬細胞吞噬功能實驗 196
實驗十二 人體結(jié)核菌素試驗 198
第十三章 動物實驗技術(shù) 200
實驗一 實驗動物保定法 201
實驗二 實驗動物接種法 203
實驗三 實驗動物采血法 207
實驗四 感染動物觀察 209
第十四章 生產(chǎn)實踐中常用微生物分離與性能鑒定技術(shù) 212
實驗一 乳酸菌的分離與性能鑒定 212
實驗二 醋酸菌的分離與性能鑒定 215
實驗三 谷氨酸產(chǎn)生菌的分離與性能鑒定 216
實驗四 枯草芽孢桿菌的分離及初篩 218
實驗五 酒曲中酵母菌的分離 219
實驗六 啤酒酵母的分離 220
實驗七 根霉的分離 221
實驗八 檸檬酸產(chǎn)生菌的分離 222
實驗九 黑曲霉糖化酶菌株的分離 223
實驗十 米曲霉的分離 224
實驗十一 土壤中自生固氮菌的分離 225
實驗十二 豆科植物根瘤中根瘤菌的分離 226
實驗十三 土壤中蘇云金桿菌的分離 227
實驗十四 土壤中放線菌的分離及其抑菌活性的測定 228
實驗十五 光合細菌的分離 230
實驗十六 產(chǎn)甲烷細菌的富集與分離 232
實驗十七 香菇純種的分離 234
第十五章 食品微生物指標檢測技術(shù) 237
實驗一 食品中菌落總數(shù)的測定 237
實驗二 食品中大腸菌群MPN的測定 241
實驗三 食品中沙門菌的檢驗 243
實驗四 食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗 251
實驗五 食品中副溶血性弧菌的檢驗 254
附錄 260
附錄一 常用染色液、指示劑及試劑的配制 260
附錄二 溶液與緩沖液的配制 265
附錄三 常用培養(yǎng)基配制 272
附錄四 微生物學(xué)實驗中常用數(shù)據(jù)表 290
附錄五 最可能數(shù)檢索表 292
附錄六 常見沙門氏菌抗原表 292
參考文獻 298