5.其他樣品的采集與制備 （1）組織勻漿：采用頸椎脫位、斷頭法、化學(xué)物質(zhì)或藥物法處死動物（用于體外代謝試驗(yàn)時，不能用化學(xué)品或藥物處死動物，以免影響藥物代謝酶的活性和含量），快速切下所需組織，加適量水或其他適宜溶劑，洗去多余的血和表面污染物。吸干水分，用剪刀把組織剪碎，進(jìn)行勻漿，然后在勻漿液中加適宜有機(jī)溶劑和／或用酸堿調(diào)整溶液pH，以提取藥物，經(jīng)離心除去蛋白質(zhì)，分取有機(jī)層進(jìn)行后續(xù)處理。組織勻漿最好當(dāng)天使用，否則，應(yīng)將其冷凍保存。（2）肝微粒體制備：以鼠肝微粒體（rat hepatic microsomes）的制備為例。動物末次給藥8h后開始禁食，禁食16h后，將動物斷頭處死，剖腹，用注射器吸取經(jīng)冰浴冷卻的生理鹽水，經(jīng)胸動脈或門靜脈注入肝臟，灌流，除去肝中血液�？焖偃〕龈闻K（以下均在4℃以下操作），用冰冷的生理鹽水（或0.25mol/L蔗糖溶液）洗凈，濾紙吸干水分，稱重，加入四倍于肝重量的0.25mol／L冰冷的蔗糖溶液，用剪刀把肝臟剪碎，制成勻漿。于9000r／min低溫離心15～20min，取上清液再于19000r／min低溫離心20min，分取上清液。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件，選擇以下任一種方法制敢微粒體。超速離心法：將上述上清液于100000r／min低溫離心45min，棄去上清液，在沉淀中加pH7.4的0.Imol/L Tris—緩沖液（含0.15mol／L KC1）混勻，100000r／min低溫離心30min后，沉淀用冰冷的0.25mol/L蔗糖溶液沖洗3次，取沉淀物，加pH7.4的50mmol／L Tris—蔗糖（或0.1mol/L Tris）緩沖液適量制成微粒體懸浮液（使蛋白質(zhì)濃度約為20mg／mL），測定微粒體懸浮液中蛋白質(zhì)濃度，于—30℃下保存?zhèn)溆�。鈣沉淀法：在上述上清液中加入CaCl2溶液，按1mL上清液加0.ImL 88mmol／L CaCl2溶液的比例將兩液混合，置冰浴中5min，時而振搖，然后于27000r/min低溫離心15～20min，除去上清液，在沉淀物中加入pH7.4的0.1mol／L Tris—緩沖液（含0.15mol／L KCI）混勻，27000r／min低溫離心30min后，取沉淀物，加pH7.4的50mmol／L Tris—蔗糖（或0.Imol／LTris）緩沖液適量制成微粒體懸浮液（使蛋白質(zhì)濃度約為20mg/mL），測定微粒體懸浮液中蛋白質(zhì)濃度，于—30℃下保存?zhèn)溆�。鈣沉淀法是利用微粒體能在鈣離子作用下聚集成團(tuán)的原理，采用較低的離心速度獲得聚集的微粒體顆粒，無需低溫超速離心機(jī)。